Využití tkáňových řezů při studiu biotransformace xenobiotik

Abstract

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Kateřina Lněničková Supervisor: Doc. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Title of diploma thesis: The use of tissue slices in xenobiotic biotransformation studies Precision-cut tissue slices are a unique in vitro model. Maintaining the tissue architecture gives them an advantage that can not be achieved in cell suspensions. They are also less demanding for number of required laboratory animals than perfused organs. The tissue slices are used mainly in biochemical, toxicological, physiological and pharmacological studies. The aim of this project was to establish optimal conditions for preparation and incubation of precision-cut tissue slices. The liver and small intestine of laboratory rats (Rattus norvegicus, Wistar strain) were used for tissue slices preparation. Three methods of monitoring of tissue slices viability were tested - MTT assay, NR-assay and the activity of lactate dehydrogenase (LDH). Monitoring of LDH leakage into the medium provided the most accurate values and this method was used in all subsequent experiments. Viability of slices after 24 h was very low. Specific activity of glutathione S-transferase detected in the intestinal slices was low and there was a significant...

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Kateřina Lněničková Školitel: Doc. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název diplomové práce: Využití tkáňových řezů při studiu biotransformace xenobiotik Tkáňové řezy jsou unikátním in vitro modelem. Zachování architektury tkáně jim poskytuje výhodu, které v buněčných suspenzích nemůže být docíleno. Zároveň mají menší nároky na počet potřebných laboratorních zvířat než perfundované orgány. Využití tkáňové řezy nalezly především v biochemických, toxikologických, fyziologických a farmakologických studiích. Cílem diplomové práce bylo zavedení optimálních podmínek pro přípravu a inkubaci řezů. Pro účel testování byla používána játra a tenké střevo potkana laboratorního (Rattus norvegicus, kmen Wistar). Pro sledování životnosti řezů byly testovány tři metody - MTT test, NR-test a aktivita laktátdehydrogenasy (LDH). Metoda sledování úniku LDH do média poskytla nejpřesnější hodnoty a byla upřednostněna u všech následných experimentů. Životnost řezů po 24 h byla velmi nízká. Specifická aktivita glutathion-S-transferasy stanovená ve střevních řezech byla nízká a po 24 h došlo k významnému poklesu. Aktivita UDP- glukuronosyltransferasy byla úspěšně stanovena pouze v jaterních řezech a střevních plátcích. Žádná z...