Analysis of WASH complex component FAM21

Abstract

Dynamika a větvení aktinové sítě je stimulována komplexem Arp2/3. Ten může být regulován WASH komplexem, který se skládá z proteinů WASH, strumpellin, SWIP, CCDC53 a FAM21. WASH komplex je v buňce asociován především s endozómy. Dříve se předpokládalo, že WASH komplex lokalizuje téměř výhradně na retromerické domény časných endozómů, které umožňují třídění a recyklaci endocytovaného materiálu. Nejnovější poznatky rozšiřují pole působnosti WASH komplexu i do jiných typů endozómů či dokonce do zcela odlišných buněčných kompartmentů. Z pěti podjednotek WASH komplexu je FAM21 zřejmě nejvýznamnějším vazebným partnerem pro další proteiny, které s WASH komplexem interagují - a to díky neobvykle dlouhé nestrukturované C-terminální doméně. FAM21 do časných, ale i pozdních endozómů a lysozómů buněčné linie U2OS. Následně byly pomocí modelu Dictyostelium discoideum hledáni noví interakční partneři FAM21 i proteiny asociované s částí C-terminální domény FAM21. Studie přináší nové poznatky týkající se interakční sítě proteinu FAM21 a zpochybňuje některé dlouho uznávané modely funkce WASH komplexu v buňkách. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)

The dynamics and function of the actin cytoskeleton depends on polymerization and branching of actin filaments, an event that is stimulated by Arp2/3. Arp2/3-dependent branching is closely linked to the pentameric WASH complex which consists of WASH, strumpellin, SWIP, CCDC53 and FAM21. WASH complex is associated mainly with endosomes. It was traditionally localized to retromer-coated domains of early endosomes which enable sorting and recycling of endocytosed material. However, latest scientific data extend the role of WASH complex to other endosomal or even non-endosomal sites. Of all the subunits of the WASH complex, FAM21 is the most prominent hub for protein-protein interactions, thanks to its long unstructured C-terminal domain. In my diploma thesis FAM21 was localized to early and late endosomes and lysosomes of U2OS human cell line. Dictyostelium discoideum was then used as a model organism to investigate FAM21 protein interactions as well as the proteins associated specifically with the C terminal domain of FAM21. Results of the study shed new light on the complex network of FAM21 interactions and question the long-standing theories on the function of WASH complex in cells. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)