Stanovení aktivity a exprese vybraných isoforem glutathion-S-transferasy v in vivo modelu glutamátem navozené obezity

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Šárka Košťáková Školitel: doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Název diplomové práce: Stanovení aktivity a exprese vybraných isoforem glutathion-S-transferasy v in vivo modelu glutamátem navozené obezity Obezita je chronické onemocnění s narůstající prevalencí v celosvětovém měřítku. Toto onemocnění je spojeno s patofyziologickými změnami v organizmu, jedna z nich je možný vliv na antioxidační obranu organizmu. Cílem této práce bylo stanovit specifickou aktivitu, proteinovou expresi a hladinu mRNA vybraných izoforem glutation-S- transferázy (GST) v cytozolu ledvin a srdcí myších samců kmene NMRI s obezitou navozenou opakovaným subkutánním podáním glutamátu sodného (MSG) a u zdravých kontrolních myší. Specifická aktivita byla stanovena spektrofotometrickou metodou za použití univerzálního a specifických substrátů. Proteinová exprese izoforem GST z rodin GSTA, GSTM a GSTP byla sledována pomocí denaturující akrylamidové elektroforézy a imunoblottingu. Hladina mRNA vybraných genů GST byla stanovena pomocí real-time PCR. V cytozolové frakci ledvin MSG myší byl pozorován nárůst celkové specifické aktivity GST (univerzální substrát) o 31 %, který byl provázen vzrůstem proteinové exprese izoformy GSTA...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Bc. Šárka Košťáková Supervisor: doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Title of diploma thesis: Assessment of activity and expression of selected isoforms of glutathione S-transferase in the in vivo model of glutamate-induced obesity Obesity is a chronic disease with an increasing prevalence worldwide. This disease is associated with many pathophysiological changes in the organism; a possible influence on the antioxidant defenses of the organism is one of them. The aim of this study was to determine specific activity, protein expression and mRNA level of selected isoforms of glutathione S-transferase (GST) in the cytosol obtained from kidney and heart of the male NMRI mice with the obesity induced by repeated subcutaneous administration of monosodium glutamate (MSG) and in healthy controls. The specific activities were assayed by spectrophotometric method using universal and specific substrates. Protein expression of GST isoforms from GSTA, GSTM and GSTP families was monitored using denaturing polyacrylamide gel electrophoresis and immunoblotting. The mRNA level of selected GST genes was determined by real-time PCR. In the cytosolic fraction of MSG mice kidney, increase in total GST specific...