Testování a optimalizace on-line SPE HPLC podmínek pro stanovení mykotoxinu patulinu v jablečných nápojích

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Anežka Holznerová Školitel: Doc. RNDr. Dalibor Šatínský, Ph.D. Název diplomové práce: Testování a optimalizace on-line SPE HPLC podmínek pro stanovení mykotoxinu patulinu v jablečných nápojích. K vývoji metody, kterou by bylo možno detekovat mykotoxin patulin v jablečných nápojích a džusech, bylo využito vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) ve spojení s on-line extrakcí na tuhou fázi (SPE) pomocí techniky přepínání kolon pro úpravu vzorku. Vzorek džusu o objemu 250 µl byl přímo dávkován do systému. Po nástřiku vzorku došlo k extrakci patulinu z matrice džusu na extrakční předkoloně. Kovová extrakční předkolona o rozměrech 25 x 3 mm, byla naplněna Supel MIP Patulin sorbentem, který je specifickým "molekulárně vtištěným polymerem" (MIP) určeným pro selektivní extrakci patulinu z jablečné matrice. Jako promývací fáze pro odstranění balastní matrice byl vybrán 1% roztok NaHCO3, který protékal MIP kolonkou rychlostí 2 ml/min po dobu 2,5 minuty. Po uplynutí této doby došlo k přepnutí ventilu a zbytkové látky matrice zachycené na extrakční předkoloně společně s patulinem byly dále separovány na analytické koloně Kinetex Biphenyl 150 x 4,6 mm (velikost částic 5µm). Mobilní fáze o složení 20 %...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Bc. Anežka Holznerová Supervisor: Doc. RNDr. Dalibor Šatínský, Ph.D. Title of Diploma Thesis: On-line SPE HPLC method optimization for determination of patulin mycotoxin in apple drinks The issue of food contamination with mycotoxins is a serious problem worldwide. These substances are highly toxic to humans and chronic effects on the human organism in very low doses may cause long-term medical complications. In our work we focused on one of the most common dietary mycotoxins - patulin, which is found in apples and related products (especially apple juices). High performance liquid chromatography (HPLC) coupled with on- line solid phase extraction (SPE) using a column switching technique for sample treatment was developed for determination of mycotoxin patulin in apple drinks and juices. A volume of 250 µl of juice sample was injected directly into the on-line SPE-HPLC system. After injection of the sample the extraction of patulin from juice matrix was carried out on SPE precolumn. SPE precolumn 25 x 3 mm was filled with Supel MIP Patulin sorbent, which is a specific "molecularly imprinted polymer" (MIP) designated for the selective extraction of patulin from an apple matrix. As the...