Studies of the interaction between human AQP5 and PIP

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Univerzita Göteborg, Švédsko Kandidát: Veronika Nešverová Školitel: Vladimír Wsól Název diplomové práce: Studie interakce mezi lidským AQP5 a PIP Aquaporin 5 je membránová kanál, který udržuje vodní rovnováhu v buňkách slzných a slinných žláz. Nefunkční transport tohoto proteinu z cytoplasmy do cytoplasmatické membrány zřejmě hraje roli při rozvoji Sjögrenova syndromu - chronického autoimunitního onemocnění. Prolaktin-inducibilní protein je cytoplasmatická bílkovina, která přispívá k patogenezi této nemoci. Tento projekt se zabývá potenciální interakcí aquaporinu 5 s prolaktin- inducibilním proteinem. Oba rekombinantní proteiny byly exprimovány kvasink- ou Pichia pastoris a purifikovány pomocí nízkotlaké kolonové chromatografie v systému ÄKTA. Glykosylace prolaktin-inducibilního proteinu byla potvrzena specifickým barvivem detekujícím pouze glykoproteiny. Byly provedeny dva pokusy koeluce na HisTrap koloně. Frakce, které se eluovaly při druhém pokusu byly analyzovány pomocí hmotnostní spektrometrie. Výsledky avšak interakci nepotvrdily. K objasnění patogeneze Sjögrenova syndromu bude zapotřebí dalšího výzkumu. Hlavním...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences University of Gothenburg Faculty of Science Department of Chemistry and Molecular Biology Candidate: Veronika Nešverová Supervisor: Vladimír Wsól Title of diploma thesis: Studies of the interaction between human AQP5 and PIP Aquaporin 5 is a membrane canal which maintains water balance mainly in lacrimal and salivary glands. A defect in this protein's trafficking from cytoplasm to cytoplasmic membrane is thought to play a role in development of Sjögren's syndrome - a chronic autoimmune disease. Prolactin-inducible protein is a cytoplasmic protein which was found to be contributing to this disease's pathogenesis. This project was aimed to study the proposed interaction between aquaporin 5 and prolactin-inducible protein. Both recombinant proteins were overexpressed in the yeast Pichia pastoris and purified using low-pressure column chromatography on an ÄKTA purification system. Glycosylation of prolactin-inducible protein was confirmed using specific glycoprotein staining. Two coelution tries were run on a HisTrap column. The fractions eluted from the second try were analysed by mass spectrometry. However results did not confirm any interaction. Further investigation is needed for the complete...