HPLC stanovení benzimidazolů

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biofyziky a fyzikální chemie Kandidát: Šárka Slezáková Vedoucí práce: Ing. Vladimír Kubíček, CSc. Název diplomové práce: HPLC stanovení benzimidazolů V této diplomové práci byly zkoumány možnosti stanovení benzimidazolů pomocí HILIC chromatografie, a to s využitím chromatografické kolony Ascentis Express HILIC 10,0 cm x 3,0 mm; 2,7 µm. Byly testovány dvě skupiny benzimidazolů. První z nich byla zaměřena na albendazol a jeho metabolity. Pokusy s těmito látkami nepřinesly uspokojivé výsledky, protože nebylo nalezeno složení mobilní fáze umožňující separaci studovaných analytů. Druhou skupinu tvořil flubendazol a jeho redukovaná a hydrolyzovaná forma. V tomto případě bylo vyzkoušeno několik složení mobilní fáze a nakonec bylo úspěšně docíleno rozdělení jednotlivých analytů ve směsi, a to za použití mobilní fáze ACN:HCOOH 0,03 mol/l (90:10). Jako vnitřní standard byl vybrán ricobendazol. Při nalezených podmínkách separace byla následně zkonstruována kalibrační křivka pro stanovení redukovaného flubendazolu v biologických vzorcích za použití ricobendazolu jako vnitřního standardu s využitím fluorescenční detekce. Klíčová slova: HILIC, HPLC, albendazol, flubendazol, kalibrační závislost.

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of biophysics and physical chemistry Candidate: Šárka Slezáková Supervisor: Ing. Vladimír Kubíček, CSc. Title of diploma thesis: HPLC Determination of Benzimidazoles In this thesis we have investigated the possibility of establishing benzimidazole with HILIC chromatography using a chromatographic column Ascentis Express HILIC 10.0 cm x 3.0 mm; 2.7 microns. Two groups of benzimidazoles were tested. The first one was focused on albendazole and its metabolites. Experiments with these substances did not produce satisfactory results, because the mobile phase composition which enables separation of the studied analytes was not found. The second group was formed by flubendazole and its reduced and hydrolyzed form. In this case, several mobile phase compositions were tested. Finally, distribution of individual analytes in a mixture, using a mobile phase ACN:HCOOH 0.03 mol/l (90:10), was successfully achieved. Ricobendazol was chosen as an internal standard. When separation conditions were found, calibration curve for the determination of reduced flubendazole in biological samples was subsequently constructed using ricobendazol as the internal standard with the use of fluorescence detection. Keywords: HILIC, HPLC, albendazole,...