Klonování a příprava plasmidů pro reportérový esej lidské GPX7

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Barbora Hanousková Školitel: Ing. Petra Matoušková, PhD. Název diplomové práce: Klonování a příprava plasmidů pro reportérový esej lidské GPx7 Glutathion peroxidázy (GPx), katalyzují redukci H2O2 a organických hydroperoxidů na vodu nebo odpovídající alkoholy. Odstraňují tak pro buňku nebezpečné sloučeniny a chrání ji před buněčným stresem. Zatím bylo objeveno v lidském genomu celkem 8 genů kódujících GPx. GPx7, které se práce věnuje, je monomerní enzym, který má antioxidační účinky a účastní se skládání proteinů. Snížená exprese GPx7 byla zaznamenána u karcinomu prsu, Barrettovy dysplázie jícnu nebo karcinomu jícnu. Spekuluje se proto o GPx7 jakožto klasickém nádorovém supresoru, jehož inaktivace může vést k rozvoji rakoviny. Diskutuje se působení mikroRNA (miRNA) v jehož důsledku dochází ke snížení exprese genu pro GPx7. MiRNA jsou malé jedno řetězcové nekódující molekuly RNA, které se významně podílejí na regulaci genové exprese. Jejich hlavní funkcí je inhibice genové exprese na post-transkripční úrovni, tedy zabraňují translaci mRNA do struktury proteinu. Děje se tak specifickou vazbou miRNA na vazebná místa hlavně ve 3'UTR oblasti mRNA. Cílem této práce je příprava plasmidů, které budou...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Bc. Barbora Hanousková Supervisor: Ing. Petra Matoušková, Ph.D Title of diploma thesis: Construction of plasmids for human GPx7 gene reporter assay Glutathione peroxidases (GPx) catalyze the reduction of H2O2 and organic hydroperoxides to H2O or corresponding alcohols. GPx remove compounds dangerous for the cell and protect cells against oxidative stress. Until now, in human genome in total 8 GPx coding genes were nidentified. Thesis deals with GPx7, a monomeric enzyme with antioxidant effect and that participates in protein folding. Lower expression of GPx7 was observed in breast cancer, Barrett's dysplasia and esophageal cancer. GPx7 might be a classic tumor marker and its inactivation can lead to cancer development. Possibly, microRNAs (miRNAs) cause a low expression of the GPx7 gene. MiRNAs are small non-coding single stranded RNA molecules that are significantly involved in regulation of gene expression. Their main function is inhibition of gene expression at post-transcriptional level, thus prevention translation of mRNA into protein. It is caused by specific binding miRNA to binding sites in 3'UTR region of mRNA. The aim of this thesis is the construction of plasmids with ligated...