Vývoj extrakčního postupu pro stanovení tokoferolů v lidském séru

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Sáva Klabačková Školitel: RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj extrakčního postupu pro stanovení tokoferolů v lidském séru V předkládané práci byl vypracován miniaturizovaný postup extrakce do kapaliny pro stanovení alfa, beta, gama a delta tokoferolu z lidského séra. Byly optimalizovány jednotlivé kroky extrakce: deproteinace, centrifugace, odpařování a závěrečná filtrace. Pro stanovení tokoferolů byla také testována extrakce do kapaliny podpořená tuhou fází (SLE), která se jeví jako velmi slibná pro využití v bioanalýze. V průběhu vývoje nového extrakčního postupu byl kladen důraz na jednoduchost, rychlost a malou spotřebu vzorků i rozpouštědel. Byla provedena také částečná validace metodiky. Nový extrakční postup je součástí již zavedené UHPLC metody pro stanovení jednotlivých forem tokoferolů a bude sloužit ke stanovení antioxidační kapacity onkologických pacientů během chemoterapeutické léčby. Klíčová slova: tokoferoly, LLE, SLE, biologický materiál

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Bc. Sáva Klabačková Supervisor: RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Title of diploma thesis: Development of extraction procedure for determination of tocopherols In the present work liquid-liquid extraction for determination of alpha, beta, gamma and delta tocopherol from human serum was developed miniaturized. Individual extraction steps as deproteinization, centrifugation, evaporation and final filtration were optimized. Solid supported liquid extraction (SLE) was also tested for determination of tocopherols and seems to be very promising for use in bioanalysis. During the miniaturization of the extraction procedure the main emphasis was placed on simplicity, speed and low consumption of samples and solvents. Method was also partly validated. The new extraction process is part of an already developed UHPLC method for the determination of individual forms of tocopherols and will serve to determine the antioxidant capacity of cancer patients during the chemotherapy treatment. Key words: tocopherols, LLE, SLE, biological material