Detekce oxidativního poškození DNA pomocí kometového testu

Abstract

Univerzita Karlova v Prahe Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických vied Kandidát: Terézia Kúdelová Školiteľ: Doc. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Školiteľ špecialista: Prof. RNDr. Rudolf Štětina, CSc. Názov diplomovej práce: Detekcia oxidačného poškodenia DNA pomocou metódy Comet Assay Opravné mechanizmy majú v organizme dôležitú úlohu. Pri poruche týchto mechanizmov vzniká nerovnováha, čo môže viesť k indukcii mnohých ochorení. Táto práca je zameraná na ochranu DNA pred oxidačným poškodením. Schopnosť ľudských buniek A549 poradiť si s oxidačným stresom bola sledovaná v podmienkach in vitro. Oxidačné poškodenie bolo indukované peroxidom vodíka (H2O2), ktorý v DNA inicioval vznik jednoreťazcových zlomov (SSBs) a súčasne oxidáciu pyrimidínových a purínových báz. Mechanizmus poškodenia a reparácie sa sledoval dvoma spôsobmi. V prvom prípade sa bunky najskôr ošetrili antioxidantom, a následne sa vystavili pôsobeniu H2O2. V druhom prípade sa bunky najskôr poškodili H2O2, a následne sa nechali reparovať s pridaním antioxidačnej látky. Testovanými antioxidantmi boli epigalokatechin galát (EGCG), glutathion (GSH) a jeho chemické modifikácie - S- allyldithioglutathion (GSH-A) a S-allyltrithioglutathion (GSH-B). Rozsah poškodenia DNA sa odhadoval pomocou metódy Comet Assay v alkalickej...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Terézia Kúdelová Supervisor: Doc. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Consultant: Prof. RNDr. Rudolf Štětina, CSc. Title of diploma thesis: Detection of the oxidative damage of DNA by the Comet Assay The reparative mechanisms have a very important role in organisms. Imbalance develops due to disruption of these mechanisms, which can lead to induction of many disorders. The aim of this diploma thesis was to study protection of DNA against oxidative damage. The ability of A549 cell line to cope with this damage was studied in vitro. Oxidative damage was induced by hydrogen peroxide (H2O2), which initiated induction of single strand breaks (SSBs) and at the same time oxidation of pyrimidine and purine bases. Mechanism of damage and reparation was detected by two methods. In the first case, cells were treated with antioxidant and then influenced by H2O2. In the second case, cells were influenced by H2O2 and then let to repair in the presence of antioxidants. Tested antioxidants were epigallocatechin gallate (EGCG), glutathione (GSH) and chemical modifications of GSH - S-allyldithioglutathione (GSH-A) and S-allyltrithioglutahione (GSH-B). The extent of damage was assessed using by alkaline version...