Optimalizácia a validácia SPE metódy pre stanovenie kvercetinu a jeho 9 metabolitov v biologickej vzorke

Abstract

Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytickej chémie Kandidát: Lucia Chrenková Školiteľka: doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Názov diplomovej práce: Optimalizácia a validácia SPE metódy pre stanovanie kvercetinu a jeho 9 metabolitov v biologickej vzorke. Hlavným cieľom tejto diplomovej práce bol vývoj a validácia novej SPE metódy pre stanovenie kvercetinu a jeho 9 metabolitov: floroglucinolu (PG); kyseliny homovanilínovej (HVA); kyseliny 3,4-dihydroxyfenyloctovej (PAA); kyseliny 3-(3- hydroxyfenyl)propionovej (HFP); kyseliny 3-hydroxyfenyloctovej (HFA); kvercetin-3- glukuronidu (Q3Gl); rutinu (RUT); tamarixetinu (TMX) a isorhamnetinu (IRN) v biologickej vzorke. Ako stacionárna fáza pre SPE bola zvolená viacmodálna kolónka MAX. Ako optimálne elučné činidlo bola určená zmes metanolu a vodného roztoku 0,5% kyseliny trifluóroctovej (95/5). Ako premývacie činidlo v prvom kroku bol vybraný pufer - 0,01M mravenčanom amónnym o pH 5,0 a v druhom kroku roztok 1% metanolu riedeným do tohto pufru. Na stanovenie kvercetinu a jeho 9 metabolitov bola využívaná ultra-vysokoúčinná kvapalinová chromatografia s tandemovou hmotnostnou detekciou. Na základe najlepšej selektivity pre kritický pár izomérov (tamarixetin a isorhamnetin) bola ako stacionárna fáza využitá kolóna BEH...

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of analytical chemistry Candidate: Lucia Chrenková Supervisor: doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Title of Graduation Thesis: Optimalization and validation of SPE method for the determination of quercetin and its 9 metabolites in biological material. The aim of this study was to develop and validate a new extraction method for the preparation of biological samples for the determination of quercetin and its 9 metabolites: phloroglucinol, 3,4-dihydroxyphenylacetic acid, homovanilic acid, 3-hydroxyphenylacetic acid, 3-(3-hydroxyphenyl)propionic acid, rutin, quercetin-3-glucuronide, tamarixetin and isorhamnetin. Due to the best retention and subsequent elution of all tested analytes the mixed mode (polymeric ion exchanging) cartridge MAX was chosen. The mixture of methanol and 0.5 % trifluoracetic acid in water (95/5) was chosen as optimal solvent for elution. The combination of 0.01M ammonium formate buffer pH 5.0 and 1% methanol in buffer pH 5.0 were chosen as washing solvent. The determination of quercetin and its 9 metabolites was performed using UHPLC- MS/MS. The best selectivity between the critical pair of analytes with the same molecular weight (tamarixetin and isorhamnetin) was achieved using BEH Shield RP18 column and...