Zavedení afinitní separace do purifikačního protokolu lidských membránově vázaných enzymů redukujícících karbonylové sloučeniny

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Radka Štýbnarová Školitel: RNDr. Lucie Zemanová, Ph.D. Název diplomové práce: Zavedení afinitní separace do purifikačního protokolu lidských membránově vázaných enzymů redukujících karbonylové sloučeniny Karbonyl-redukující enzymy hrají důležitou roli v metabolismu mnohých eobiotik (steroidů, prostaglandinů) i xenobiotik (doxorubicinu, daunorubicinu, oracinu, NNK, haloperidolu). Vzhledem k jejich substrátové specifitě hrají také důležitou roli ve vývoji některých onemocnění, jako je rakovina závislá na hormonech nebo metabolický syndrom. Zatímco cytosolické karbonyl-redukující enzymy jsou dobře charakterizovány, informací o membránově vázaných je vzhledem k jejich náročnému studování podstatně méně. V současnosti jsou popsány pouze tři mikrosomální karbonyl-redukující enzymy účastnící se metabolismu xenobiotik (11β-HSD1, DHRS7 and DHRS3), z nichž pouze 11β-HSD1 je dobře charakterizována. Nicméně, na základě výzkumu protinádorového léčiva oracinu a jeho stereospecifity redukce se předpokládá existence dalších mikrosomálních karbonyl-redukujících enzymů, účastnících se jeho metabolismu a inaktivace. Abychom mohli izolovat tyto "neznámé" enzymy, byl vyvinut afinitní nosič s imobilizovaným ligandem...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Radka Štýbnarová Supervisor: RNDr. Lucie Zemanová, Ph.D. Title of diploma thesis: Implementation of affinity separation step into the purification protocol of human membrane-bound carbonyl-reducing enzymes Carbonyl reducing enzymes play important role in the metabolism of various eobiotic (e.g. steroids, prostaglandins) and xenobiotic (e.g. doxorubicin, daunorubicin, oracin, NNK, haloperidol) compounds. Due to their substrate specificity, they also play a role in development of some diseases like hormone-dependent cancers and metabolic syndrome. While cytosolic carbonyl reducing enzymes are well characterised the knowledge about membrane-bound types is quite poor because their study is demanding. Actually, until today there are only three described microsomal carbonyl reducing enzymes participating in the metabolism of xenobiotic compounds (11β-HSD1, DHRS7 and DHRS3) of which only the 11β-HSD1 is well characterized. However, based on the research of anticancer drug oracin reduction stereospecificity, there were predicted other microsomal carbonyl reducing enzymes involved in its metabolism and inactivation. In order to isolate these "unknown" enzymes the in-house developed affinity...