Využití HPLC pro analýzu astaxanthinu v potravních doplňcích

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Hana Ferklová Školitel: doc. RNDr. Dalibor Šatínský, Ph.D. Název diplomové práce: Využití HPLC pro analýzu astaxanthinu v potravních doplňcích Byla optimalizována a validována HPLC metoda pro stanovení astaxanthinu současně s dalšími běžně se vyskytujícími karotenoidy: luteinem, beta-karotenem a cantaxanthinem. Tato metoda pak byla použita k stanovení těchto sloučenin ve vybraných doplňcích stravy s astaxanthinem: Omega Complete Super (Jamieson), KRILOIL (Life Science) a Krilový olej strong (Vieste). Analýza probíhala na koloně Ascentis Express RP-amide (100 x 4,6 mm, 5 µm) Supelco Analytical. Použita byla mobilní fáze o složení acetonitril a směs methanolu s dichlormethanem (1:1) s elučním gradientem a průtokem 1 ml/min. Analýza probíhala při teplotě 35řC. K detekci byl použit DAD detektor při vlnové délce 470 nm. Ukázalo se, že doplňky stravy obsahují esterifikovanou formu astaxanthinu, pro jejíž separaci na chromatografické koloně není metoda vhodná. Ta byla optimalizována pro separaci volné sloučeniny, kterou se však nepodařilo vyextrahovat. Byla proto vyvinuta alternativní spektrofotometrická metoda pro stanovení obsahu astaxanthinu v doplňcích s využitím HPLC systému bez zapojení kolony.

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Kralove Department of Analytical Chemistry Candidate: Hana Ferklova Supervisor: doc. RNDr. Dalibor Satinsky, Ph.D. Title of Diploma Thesis: HPLC for astaxanthine analysis in food supplements A new HPLC method was optimized and validated to determine astaxanthin and other carotenoids: lutein, beta-carotene and canthaxanthin. This method was used for determination of these analytes in selected dietary supplements: Omega Complete Super (Jamieson), KRILOIL (Life Science) a Krilovy olej strong (Vieste). The separation was performed with Ascentis Express RP-amide column (100 x 4.6 mm, 5 µm) Supelco Analytical. A mobile phase consisted of acetonitrile and mixture of methanol/dichloromethane (1:1) using gradient elution and flow rate 1 ml/min. The analytes were detected with DAD detector at wavelength 470 nm. This method was found unsuitable to determine astaxanthin in the dietary supplements, which contained esterified form of the carotenoid. The method was developed to determine a free fraction of the substance, which could not be extracted. Therefore, an alternative spectrophotometric method was developed to determine astaxanthin in dietary supplements using HPLC system without chromatography column.