Stanovení exprese enzymů DHRS7B a DHRS7C v lidských tkáních

Abstract

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Klára Kozáková Školitel: prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Název diplomové práce: Stanovení exprese enzymů DHRS7B a DHRS7C v lidských tkáních Dehydrogenáza/reduktáza SDR nadrodiny člen 7B (DHRS7B) a 7C (DHRS7C) jsou lidské enzymy patřící do nadrodiny dehydrogenáz/reduktáz s krátkým řetězcem (SDR). Tato velice stará a rozsáhlá nadrodina zahrnuje členy, kteří hrají roli v různých fyziologických dějích a patologických stavech. I přesto, že jsou v současné době lidské SDR enzymy více studované, patří stále asi polovina z nich mezi málo charakterizované, jako např. enzymy DHRS7B a DHRS7C. Cílem této práce bylo stanovit expresi lidských enzymů DHRS7B a DHRS7C na úrovni mRNA i na úrovni proteinu a tím přispět k rozvoji nových poznatků o těchto enzymech. Exprese enzymů byla stanovena ve vzorcích lidských tkání. Ze vzorků byla izolována mRNA, která byla použita pro přepis do cDNA. Vzniklá cDNA byla použita jako templát pro provedení qPCR s fluorescenční detekcí pomocí SYBR GREEN I. Stanovení na úrovni proteinu bylo provedeno v homogenátech lidských tkání pomocí metody Western blotting s chemiluminiscenční detekcí. Exprese mRNA enzymu DHRS7B byla nejsilnější ve varlatech, a o něco nižší v kosterním svalu,...

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Klára Kozáková Supervisor: prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Title of diploma thesis: Determination of the expression of enzymes DHRS7B and DHRS7C in human tissues Dehydrogenase/reductase (SDR family) member 7B (DHRS7B) and 7C (DHRS7C) are human enzymes that belong to the short chain dehydrogenase/reductase (SDR) superfamily. This very old and extensive superfamily includes members, which play an important role in different physiological and pathological processes. In spite of that the SDR enzymes are currently more studied, still about half of these enzymes are only poorly characterized, such as DHRS7B and DHRS7C. The aim of this study was the determination of the expression profiles of human enzymes DHRS7B a DHRS7C at mRNA and protein level and thus brings new knowledge of these enzymes. Expression of enzymes was tested in human tissues. RNA was isolated from the samples and used for transcription to cDNA. Obtained cDNA was utilized as a template for qPCR with fluorescence SYBR GREEN I detection. Determination of enzymes at protein level was done in homogenates of human tissues by using a Western blotting with chemiluminescence detection. The level of expression mRNA DHRS7B was strongest in testes...