Spektrofotometrické stanovení aktivity cholinesterasy v přítomnosti karbamátových inhibitorů

Abstract

Charles University, Faculty o Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmaceutical Analysis Student: Ondřej Keresteš Supervisor: PharmDr. Marta Kučerová, Ph.D. Consultant: pplk. prof. RNDr. Miroslav Pohanka, Ph.D., DSc. Title of bachelor's thesis: Spectrophotometric determination of cholinesterase activity using carbamate inhibitors Nowadays, two types of cholinesterase are known. Acetylcholinesterase is the first one (AChE, EC 3.1.1.7), whose function is the cleavage bond of acetylcholine to cholinergic receptors in the central and peripheral nervous system. The second type is butyrylcholinesterase (BChE, EC 3.1.1.8), sometimes called plasmatic cholinesterase or pseudocholinesterase. Whole function of BChE is yet not fully understood. Carbamate inhibitors belong to reversible cholinesterase inhibitors. Their effect decreases in time due to their own hydrolysis into inactive compounds. The goal of this experimental work was to obtain the kinetic parameters of AChE and BChE, and optimize the method for determination of selected carbamate inhibitors - carbofuran and physostigmine/eserine. Determination of cholinesterase activity was made with Ellman method. It turned out, firstly, that both of inhibitors act very similarly, time to reach maximum of inhibition was about...

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Student: Ondřej Keresteš Vedoucí práce: PharmDr. Marta Kučerová, Ph.D. Školitel: pplk. prof. RNDr. Miroslav Pohanka, Ph.D., DSc. Název bakalářské práce: Spektrofotometrické stanovení aktivity cholinesteras v prostředí karbamátových inhibitorů V současné době jsou známy dva typy cholinesteras. Prvním je acetylcholinesterasa (AChE, EC 3.1.1.7), která je zodpovědná za štěpení acetylcholinu v centrálním i periferním nervovém systému. Druhým typem je butyrylcholinesterasa (BChE, EC 3.1.1.8), někdy nazývaná též pseudocholinesterasa. Její význam ještě nebyl plně pochopen. Inhibitory karbamátového typu se řadí mezi reversibilní inhibitory cholinesteras. Jejich účinnost časem slábne vlivem jejich vlastní hydrolýzy. Cílem této experimentální práce bylo jednak stanovit kinetické parametry AChE a BChE, dále optimalizovat metodu pro stanovení vybraných karbamátových inhibitorů - karbofuranu a fysostigminu. Stanovení aktivity cholinesteras bylo provedeno Ellmanovou metodou. Provedena byla mimo jiné optimalizace stanovení rychlosti vazby inhibitorů. V našem případě bylo dosaženo plného navázání inhibitorů již mezi 7-8 minutou. Bylo zjištěno, že oba inhibitory mají na zkoumané enzymy podobný účinek....