Sulfation and desulfation of neuroactive steroids in normal and neoplastic primate brain tissues

Abstract

SOUHRN Byla vyvinuta a aplikována nová metodika pro stanovení aktivit STS a SULT v mozkové tkáni primátů. Stanovení aktivity STS bylo zaloŽeno na vlastní enzymové, extrakci reakčníhoproduktu' jeho následné derivatizací a stanovení metodou GC-MS. Aktivita SULT byla stanovena nepřímo po separaci nezreagovaného substrátu a následné hydrolýze produktu enzymové reakce. Detekce byla provedena radioimunoanalýicky. Pro obě enzymové reakce byly nalezeny optimální podmínky. Jak reakce katalyzovaná STS, tak reakce katalyzovaná SULT vykazova|y významné závislosti struktury enzymu, případně reakčníhocentra na katalytické aktivitě. Navíc byla pozorována dosud nepopsaná substrátová inhibice STS a nayrŽena hypotéza obj asňuj ícíýzio lo gický vý znam tohoto efektu. Stanovení aktivit STS a SULT v různých oblastech mozku opic odhalilo rozdíly jak mezi jednotliými mozkovými částmi' tak mezi oběma pohlavími. Nicméně vzhledem k nízkémupočtuvzorkůnebyla vyhodnocena statistická významnost. RovněŽ byly stanoveny základní kinetické parametry pro STS. Aktivita STS a SULT v lidských mozkových nádorech vykazova|a statisticky vysoce významné rozdíly mezi jednotlivými typy nádorů. Dále byla odha|ena tendence tumorů ke tvorbě klastru charakterizovaných jak aktivitou STS, tak SULT. Tato skutečnost odhalila specifrcké znaky zvláště pro...

A novel methodology for the determination of steroid sulfatase (STS) and sulfotransferase (SULT) activities in primate brain tissue have been developed and evaluated. STS activity determination was based on enzyme assay followed by liquid-liquid extraction ofthe reaction product, its subsequent derivatization and gas chromatography-mass spectrometry analysis. Indirect determination including product hydrolysis and determination by radioimmunoassay was used for assessment of SULT activity. For both, STS and SULT assays, optimal reaction conditions were found while strong structure-activity relationships for both enzyme activities were observed. Additionally, so far unidentified high-substrate inhibition for STS was revealed wíth a hypothesis suggesting its physiotogícal relevance' Determinations of STS and SULT activities in monkey brain regions revealed differences between genders and brain regions. Due to low number of samples, significance was not described. For STS kinetic characteristics were determined. In human brain tumors, STS and SULT activities showed highly significant differences according to diagnoses. Furthermore, tendency to cluster formation with respect to both enzyme activities emerged. It indicated specific metabolic characteristics especially for glioblastomas considered as the...