Optimalizace metodiky vedoucí k hodnocení citlivosti biofilm formujících mikrobiálních agens vůči látkám s antimikrobním potenciálem

Abstract

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Studijní obor: Farmacie Kandidát: Jana Roubalová Konzultant: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Název diplomové práce: Optimalizace metodiky vedoucí k hodnocení citlivosti biofilm formujících mikrobiálních agens vůči látkám s antimikrobním potenciálem Cíl práce: Cílem této diplomové práce bylo optimalizovat metodický přístup formování kvasinkových biofilmů in vitro na tzv. kolíčcích a na stěnách jamek 96 jamkového panelu. Tento systém formování biofilmů by měl být analogickým přístupem ke komerčně dostupnému systému Calgary Biofilm Device. Pro optimalizaci metodiky bylo použito 10 kmenů kvasinek rodu Candida a 4 různá kultivační média (nutričně chudá/bohatá). Mezi testovanými kvasinkovými kmeny byly jak kmeny referenční, tak klinické izoláty. Metody: Schopnost formace kvasinkových biofilmů různých kmenů v různých kultivačních médiích byla hodnocena přístupem fixace, barvení formovaných biofilmů pomocí krystalové violeti a následné extrakce a spektrofotometrického proměření intenzity extrahované barvy. Výsledky: Jednotlivé kmeny byly po kultivaci v různých médiích zařazeny do kategorií dle schopnosti tvořit biofilm. V jamkách obecně docházelo k silnější adherenci kvasinek než-li na kolíčcích, kam kvasinky adherovaly velmi slabě nebo vůbec. U většiny...

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Study program: Pharmacy Candidate: Jana Roubalová Consultant: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Title of thesis: Optimization of methods for sensitivity evaluation of biofilm-forming microbial agents towards substances with antimicrobial potential Background: The aim of this diploma thesis was to optimize the methodical approach to the production of yeast biofilms in vitro on the so-called pegs and the walls of the wells of the 96-well panel. This biofilm formation system should be an analogous approach to the commercially available Calgary Biofilm Device. 10 strains of Candida yeast and 4 different culture media (nutritionally poor / rich) were used to optimize the methodology. Both the reference strains and the clinical isolates were among the yeast strains tested. Methods: The ability to form yeast biofilms by different strains in different culture media was evaluated by the approach of fixation, staining of the formed biofilms by crystal violet and extraction and spectrophotometric measurement of the intensity of the extracted color. Results: Individual strains, after cultivation in different media, were categorized according to their ability to form biofilm. Larger yeast adherence occurs in the wells than on pegs where the yeast adhered very...