Využití kapalinové chromatografie pro stanovení vybraných aminokyselin a agmatinu v biologickém materiálu

Abstract

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Analytické chemie Kandidát: Niké Hazuková Vedoucí diplomové práce: doc. RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Název diplomové práce: Využití kapalinové chromatografie pro stanovení vybraných aminokyselin a agmatinu v biologickém materiálu Klíčová slova: agmatin, L-arginin, L-citrulin, L-ornitin, UHPLC, chronické rány Tato diplomová práce se zabývá vývojem metody pro stanovení agmatinu, L-argininu, L-citrulinu, L-ornitinu v chronických ranách pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Cílem této diplomové práce, bylo vytvořit vhodné chromatografické podmínky pro již zmíněné analyty a možnost využít tuto metodu v rámci klinického výzkumu a praxe. Během vývoje byly testovány čtyři chromatografické kolony, jako finální kolona byla zvolena Meteoric Core C18 BIO o rozměrech 100 x 4,6 mm, 16 nm, 2,7 μm, (YMC, Německo) s povrchově porézními částicemi, pro kterou byly zvoleny tyto podmínky: mobilní fáze byla 100% 10 mM AMFO (o pH 2,5), teplota byla nastavena na 25řC, průtok MF na 0,25 ml/min a nástřik vzorků byl zvolen na 2 μl. Po provedení optimalizace separačních podmínek, byla metoda aplikována na biologický materiál (výpotky z chronických ran), vzorky byly upraveny pomocí extrakčních postupů (ultrafiltrace, deproteinace). Metoda...

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Niké Hazuková Supervisor: Assoc. Prof. RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Title of diploma thesis: High performance liquid chromatogramy determination of selected amino acids and agamtine in biological material Keywords: agmatine, L-arginine, L-citruline, L-ornitine, UHPLC, chronic wounds This thesis follows up the metod development for the determination of agmatine, L- arginine, L-citrulline, L-ornithine in chronic wounds using ultra-high performance liquid chromatography. The aim of this thesis was to optimize suitable chromatographic conditions for the already mentioned analytes with possibility to use this method in clinical research and practice. Four chromatographic columns were tested. Finally the Meteoric Core C18 BIO the dimensions 100 x 4.6 mm, 16 nm, 2.7 μm (YMC, Germany) was chosen, using these conditions: the mobile phase (MF) was 100% 10 mM AMFO (pH 2.5), the temperature was set at 25 řC, the MF flow rate was 0.25 mL / min, and the injection volume was 2 μL. After optimization of the separation conditions, the method was applied to biological material (exudate from chronic wounds), samples were modified by selected extraction procedures as ultrafiltration and protein precipitation....