Cytomegalovirová infekce kmenem HCMV a její vztah k imunosupresi

Abstract

Cíl práce: Cílem diplomové práce bylo zavedení metodiky in vitro infekce lidským cytomegalovirem (HCMV) kmene VR-1590, studium průběhu in vitro HCMV infekce xCelligence RTCA metodikou a použití ionizujícího záření k zajištění imunosuprese u hostitelských fibroblastů. Detekce a analýza vybraných signálních drah imunosuprimovaných hostitelských buněk za použití 1D elektroforézy, Western blotu, imunodetekce a protilátkové PathScan technologie. Metody: V rámci této práce bylo pracováno s infekcí HCMV kmene VR-1590 a lidskými embryonálními fibroblasty linie MRC-5. Byly využity základní laboratorní techniky, dále ionizujícího gama záření produkovaného uzavřeným zářičem 60 Co jako faktoru imunosuprese. Změny signálních drah v hostitelských fibroblastech byly sledovány pomocí PathScan protilátkové technologie a dále ověřovány pomocí jednorozměrné elektroforézy s využitím western blot techniky. Výsledky: Buněčná proliferace hostitelských buněk byla ověřena v reálném čase. K přípravě vzorků byly vytvořeny modelové situace využívající infekci optimalizovanou dávkou infekce HCMV a následným navozením imunosuprese či modelu s navozenou imunosupresí. Exprese detekovaných signálních molekul (p53, Bad, Kaspáza 3, Stat1, Stat3, ERK1/2 a dalších) ukazuje, že buňky ovlivněné ionizujícím zářením patrně zanikají cestou...

Goal of the thesis: The main aim of this thesis was to introduce the in vitro cytomegalovirus (HCMV) infection method of the VR-1590 strain, followed by study of the in vitro HCMV infection by xCelligence RTCA methodology and to use ionizing radiation to provide immunosuppression in host fibroblasts. Detection and analysis of selected signaling pathways of immunosuppressed host cells using 1D electrophoresis, Western blot, immunodetection and antibody PathScan technology. Methods: In this work, HCMV infection of VR-1590 and human embryonic fibroblasts of the MRC-5 line was performed. Basic laboratory techniques, as well as ionizing gamma rays produced by the enclosed 60 Co radiator, were used as a factor for immunosuppression. Changes in signaling pathways in host fibroblasts were monitored by PathScan antibody technology and further verified by one-dimensional Western blot electrophoresis techniques. Results: Cellular proliferation of the host cells was verified in real time. Specimens were developed using modeling situations using optimized dose of HCMV infection and subsequent induction of immunosuppression or model with induced immunosuppression. Expression of detected signal molecules (p53, Bad, Caspase 3, Stat1, Stat3, ERK1/2 and others) indicates that cells affected by ionizing radiation...