Oprava oxidativního poškození DNA u vybraných buněčných linií lidského a křeččího původu

Abstract

1. SOUHRN Jedním z mechanismů oprav DNA poškozené vlivem vnějších činitelů je nukleoti- dová excizní reparace (NER). Ta hraje roli především při odstraňování následků způsobených UV zářením. Poškozené báze se ve formě pyrimidinových dimerů enzymaticky vyštěpují z DNA jako součást oligonukleotidů. Působení UV světla na DNA se však projevuje též nepřímo, a to oxidací bází. V našem experimentu jsme se snažili zjistit, zda buňky deficientní v nukleotidové excizní reparaci jsou schopny opravovat poškození indukované pouze oxidativním činitelem. Stanovovali jsme velikost poškození DNA v buňkách in vitro a schopnost jejich re- parace po ovlivnění roztokem peroxidu vodíku o různé koncentraci. K experimentům jsme použili buněčné linie křečíka čínského, a to rodičovské buňky AA8 a od nich odvozené buňky UV-20, které jsou defektní v genu ERCC1. Tento gen se podílí na tvorbě nukleáz účastnících se nukleotidové excizní reparace. Ke stanovení jsme použili metodu alkalického kometového testu, jejíž základem je alkalická gelová elektroforéza. Princip této metody spočívá v detekci zlomů, které vznikají v poškozených alkalilabilních místech. Hodnotili jsme počet jednořetězcových zlomů DNA. Detekovali jsme buď zlomy indukované samotným peroxidem vodíku (SSB), nebo zlomy vzniklé po působení enzymu, který v DNA specificky...

Nucleotide excision repair (NER) is one of the mechanisms of how to repair DNA damaged by the external influences. First of all, it plays the role when removing the results caused by UV radiation. The damaged bases in the form of pyrimidine dimers are enzymatically splitted out from DNA as part of oligonucleotides. The effect of the UV light on DNA is however manifested also indirectly, by oxidation of the bases. In our experiment we tried to find out whether the cells deficient in nucleotide excision repair are able to repair the damages induced only by oxidative agent. We stated the extent of DNA damages in the cells in vitro and the ability of their re- paration after treatment with the dilution of hydrogen peroxide in different concentrations. During the experiments we used the cell lines of a Chinese hamster, namely the parental cell line AA8 and their derivative UV-20, which is defective in gene ERCC1. This gene takes part in creation of nucleases participating in NER. For measuring of DNA lesions we used the method of alkaline comet assay, the ba- sis of which is alkaline single-cell gel electrophoresis. The principle of this method consists in the detection of DNA strand breaks originating in the damaged alkali-labile sites. We evaluated the number of DNA single-strand breaks. We detected...