Klonování a příprava sond pro detekci P-glykoproteinu z vlasovky slezové

Abstract

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Bc. Valentýna Funioková Supervisor: Doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Title of diploma thesis: Construction of plasmid and probes for detection of P-glycoprotein in Haemonchus contortus Anthelmintic resistence in parasitic nematodes has become an alarming issue worlwide. Haemonchus contortus, a pathogenic nematode of small ruminants, has become resistant to all types of anthelmintic drugs. Important players of the anthelmintic resistence are ABC transporters, most notably P-glycoproteins. In Haemonchus contortus, 10 homologues of Pgp have been identified. Research of individual P-glycoproteins could reveal particular transporters involved in anthelmintic resistence mechanisms. The diploma thesis focuses on P-glycoprotein-9.2, whose constitutive expression is higher in resistant strains of H. contortus than in susceptible strain. The opening chapters of the diploma thesis deals with the topic of parasitic nematode H. contortus, anthelmintic resistence and description of ABC transporters. The main part of this thesis is dedicated to construction of plasmids for in vitro preparation of digoxigenin-labelled RNA probes, and detection of P-glycoprotein-9.2 mRNA by chromogenic RNA in situ...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Valentýna Funioková Školitel: doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Klonování a příprava sond pro detekci P-glykoproteinu z vlasovky slezové Anthelmintická rezistence gastrointestinálních hlístic je významným problémem celosvětového rozsahu. Vlasovka slezová, parazitická hlístice malých přežvýkavců, je v současnosti schopna rozvinout rezistenci vůči všem třídám anthelmintických léčiv. Jedním z mechanismů rozvoje této rezistence může být efluxní transport léčiv zajištěný P-glykoproteiny ze skupiny ABC transportérů. U vlasovky slezové nalézáme celkem 10 homologů tohoto transportéru. Studium jednotlivých transportérů by mohlo odhalit konkrétní homology zapojené do mechanismů anthelmintické rezistence. V předkládané diplomové práci jsme se zaměřili na P-glykoprotein-9.2, který vykazuje zvýšenou konstitutivní expresi u rezistentních kmenů vlasovky slezové. Úvodní část diplomové práce přináší celistvý přehled informací týkajících se této hlístice, anthelmintické rezistence a ABC transportérů. Experimentální část práce je věnována přípravě plazmidů pro in vitro syntézu hybridizačních RNA sond značených digoxigeninem a jejich užití při detekci mRNA P-glykoproteinu-9.2 v histologických řezech...