Využití LC-MS/MS v in vitro transportních experimentech

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department: Deparrment of Pharmaceutical Chemistry and Pharmaceutical Analysis Candidate: Šárka Salvová Supervisor: PharmDr. Nela Váňová, Ph.D. Title of Thesis: Application of LC-MS/MS methods to in vitro transport experiments Gilteritinib, an antineoplastic drug, is used for targeted anticancer therapy. It belongs to the group of receptor tyrosine kinase inhibitors. Its structure is based on a pyrazinecarboxamide skeleton. So far, it has been chromatographically determined in biological material only from plasma. In this diploma thesis, gilteritinib was analyzed from Opti-MEM cell medium to be used in vitro transport experiments. Subsequently the LC-MS/MS method was optimized and validated. During progression and optimization of the LS-MS/MS method, the Thermo Finnigan LCQ Advantage Max Ion Trap was observed that with an increasing number of injections had been shown increasing signal suppression for gilteritinib and its internal standard (maraviroc), which reached up to 75 % after only 30 sprays. Contamination of the inlet to the ion transfer capillary, to which the ion source (electrospray) is placed diagonally, was also visible. Thereafter it was tested whether another construction of the ion source (orthogonal position of electrospray)...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Autor: Šárka Salvová Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Nela Váňová, Ph.D. Název diplomové práce: Využití LC-MS/MS v in vitro transportních experimentech Gilteritinib, léčivo ze skupiny antineoplastik, se využívá k cílené protinádorové terapii. Řadí se k inhibitorům tyrosinkinázových receptorů. Jeho struktura je založena na pyrazinkarboxamidovém skeletu. Doposud byl chromatograficky stanovován v biologickém materiálu pouze z plazmy. V této diplomové práci byl gilteritinib stanovován z buněčného média Opti-MEM za účelem využití pro in vitro transportní experimenty a následně byla optimalizovaná a validovaná metoda LC-MS/MS. V průběhu vývoje a optimalizace LC- MS/MS metody byla u hmotnostního spektrometru Thermo Finnigan LCQ Advantage Max Ion Trap s narůstajícím počtem nástřiků pozorována zvyšující se suprese signálu pro gilteritinib i jeho vnitřní standard (maravirok), která dosahovala až 75 % po pouhých 30 nástřicích. Také byla viditelná kontaminace vstupu na iontransferovou kapiláru, ke které je iontový zdroj (elektrosprej) umístěn diagonálně. Dále bylo testováno, zdali jiná konstrukce iontového zdroje (ortogonální poloha elektrospreje) problém nevyřeší. Po transferu metody na...