Vývoj metody úpravy vzorku pro stanovení vybraných ochratoxinů v moči pomocí UHPLC-MS/MS

Abstract

Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Bc. Barbora Šejvlová Supervisor: prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Title of the diploma thesis: Development of a sample preparation method for the determination of selected ochratoxins in urine by UHPLC-MS/MS The aim of the work was to develop a method for the determination of ochratoxins A, B, C, and  in urine with the lowest possible quantification limit, and subsequently to carry out the validation of this method, which would be applicable in clinical practice. The method of ultra- high-performance liquid chromatography in a reversed-phase mode in coupled with tandem mass spectrometry was selected for the analyse. Optimalization of sample preparation involved: micro-solid phase extraction in pipette tips (-SPE-PT), dilute and shoot (DAS), supported liquid extraction (SLE) and finally salting-out assisted liquid-liquid extraction (SALLE). The method recovery, the interference of the matrix and the limit of quantification of the given method were evaluated. Method validation was carried out on an ACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μm, 2.1 x 100 mm column from Waters, using -SPE-PT as sample preparation technique. Method accuracy ranged from 68 to 122 % for all analytes, and method...

Bc. Barbora Šejvlová Školitel: Vývoj metody úpravy vzorku pro stanovení vybraných ochratoxinů v moči Cílem práce bylo vyvinout metodu pro stanovení ochratoxinů A, B, C a  moči s co nejnižším a následně provést validaci této metody, která by byla aplikovatelná vysokoúčinné kapalinové ci přípravy vzorku b fázi pomocí pipetovacích špiček  PT), metoda ředění (DAS), extrakce z nosiči (SLE) a jako poslední extrakce Byla hodnocena výtěžnost metody, interference matrice a také limit kvantifikace dané Následně byla provedena validace na koloně ACQUITY UPLC BEH C18 1,7 μm, 2,1 x  rozmezí od 68 do 122 % pro všechny analyty a přesnost metody u všech analytů měla RSD menší než 20 %. Byl stanoven LLOQ, pro OTA byl stanoven 0,01 ng/ml, pro OTB a  0,05 ng/ml. ULOQ byl pro všechny analy testování matricových efektů, kdy podmínky byly splněny pouze pro OTA na obou koncentračních hladinách 5 a 20 ng/ml a OTB pouze u 5 ng/ml. Pro  řádech stove Klíčová slova: ochratoxiny, moč, příprava vzorku k 