Zavedení diagnostiky gastrointestinálních hlístic pomocí RT-PCR

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Bc. Kristýna Bezdíčková Supervisor: doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Title of diploma thesis: Implementation of the diagnosis of gastrointestinal nematodes using RT-PCR Gastrointestinal nematodes can cause various diseases in farm animals. Individuals are often infected with several types of parasites at once. Since the symptoms tend to be similar, the disease is called parasitic gastroenteritis. Not only do nematodes threaten the animal health, but they can also have a major impact on the economy of the entire farm. Diagnosis is not always easy. In addition to morphological and coprological methods, biochemical or molecular analysis can be used, which tends to be more sensitive and accurate. We tried to diagnose gastrointestinal nematodes using the molecular RT-PCR method. In the thesis we focused on 6 species of nematodes (Haemonchus contortus, Teladorsagia circumcinta, Trichostrongylus spp., Nematodirus battus, Chabertia ovina and Ashworthius sidemi). The material used was feaces samples from sheep from which we isolated gDNA. The control material was gDNA isolated from H. contortus eggs and gDNA obtained from whole parasite bodies. RT-PCR was tested using the fluorescent dye SYBR Green I and...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Kristýna Bezdíčková Školitel: doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Zavedení diagnostiky gastrointestinálních hlístic pomocí RT-PCR Gastrointestinální hlístice mohou způsobovat různě závažná onemocnění hospodářských zvířat. Jedinci bývají často nakaženi několika druhy parazitů najednou. Vzhledem k tomu, že symptomy bývají podobné, onemocnění se nazývá jako parazitická gastroenteritida. Nejen, že hlístice ohrožují zdraví zvířat, ale také mohou mít velký dopad na ekonomiku celé farmy. Diagnostika nebývá jednoduchá. Kromě morfologických a koprologických metod je možné využít biochemickou či molekulární analýzu, která bývá citlivější a přesnější. V našem případě jsme zkoušeli diagnostikovat gastrointestinální hlístice pomocí molekulární metody RT-PCR. V diplomové práci jsme se zaměřili na 6 druhů hlístic (Haemonchus contortus, Teladorsagia circumcinta, Trichostrongylus spp., Nematodirus battus, Chabertia ovina a Ashworthius sidemi). Materiálem byly vzorky trusu od ovcí, ze kterých jsme vyizolovali gDNA. Kontrolním materiálem byla gDNA získaná z vajíček H. contortus a gDNA získaná z celých těl parazitů. Zkoušena byla RT-PCR s využitím fluorescenčního barviva SYBR Green I a TaqMan sondy....