Vplyv blokácie endoglínu na zápalom indukovanú endotelovú dysfunkciu u ľudských aortálnych endotelových buniek

Abstract

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Názov diplomovej práce: Vplyv blokácie endoglínu na zápalom indukovanú endotelovú dysfunkciu u ľudských aortálnych endotelových buniek Autor: Andrea Škubová Vedúci diplomovej práce: PharmDr. Katarína Tripská, Ph.D. Cieľ práce: Cieľom tejto diplomovej práce bolo popísať vplyv zápalu indukovaného prostredníctvom TNF-α a LPS na expresiu endoglínu a jeho transkripčných faktorov, expresiu biomarkerov endotelovej dysfunkcie, hladinu solubilného endoglínu a adhéziu a transmigráciu monocytov cez ľudské aortálne endotelové bunky. Ďalej sme chceli objasniť vplyv blokácie endoglínu prostredníctvom monoklonálnej protilátky TRC105 (carotuximab) na tieto procesy. Metódy: V tejto diplomovej práci boli použité ľudské aortálne endotelové bunky (HAEC), ktoré boli vystavené po dobu 16 hodín pôsobeniu TNF-α (10 ng/ml) a LPS (100 ng/ml) a po dobu 12 hodín pôsobeniu TRC105 (300 µg/ml). Metódou real-time qRT-PCR sme merali mRNA expresiu endoglínu a jeho transkripčných faktorov (KLF6, RelA, NR1H3), mRNA expresiu zápalových adhéznych molekúl (ICAM-1, VCAM-1, SELE) a mRNA expresiu enzýmu MMP- 14. Pomocou prietokovej cytometrie sme detekovali proteínové hladiny endoglínu, proteínové hladiny zápalových adhéznych molekúl (ICAM-1,...

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biological and Medical Sciences Title of Diploma Thesis: Effect of endoglin blockage on inflammation-induced endothelial dysfunction in human aortic endothelial cells Author: Andrea Škubová Supervisor of Diploma Thesis: PharmDr. Katarína Tripská, Ph.D. Aim: The aim of this thesis was to describe the effect of TNF-α and LPS-induced inflammation on the expression of endoglin and its transcription factors, the expression of biomarkers of endothelial dysfunction, the levels of soluble endoglin, and the adhesion and transmigration of monocytes through human aortic endothelial cells. We further investigated the effect of endoglin blockage by the monoclonal antibody TRC105 (carotuximab) on these processes. Methods: In this thesis, human aortic endothelial cells (HAEC) were used, and they were exposed for 16 hours to TNF-α (10 ng/ml) and LPS (100 ng/ml) and for 12 hours to TRC105 (300 µg/ml). The mRNA expression of endoglin and its transcription factors (KLF6, RelA, NR1H3), mRNA expression of inflammatory adhesion molecules (ICAM-1, VCAM-1, SELE) and mRNA expression of MMP-14 enzyme were measured by real time qRT-PCR. Using flow cytometry, we detected protein levels of endoglin, protein levels of inflammatory adhesion molecules...