Inhibition of TET-1 protein by iron chelators

Abstract

SK Cieľom tejto práce bolo študovať nové syntetické chelátory železa a študovať ich potenciálne využitie pri inhibícii proteínu TET1. Epigenetické mechanizmy, ako je hydroxymetylácia DNA, sú sľubným cieľom pri mnohých závažných patológiách, vrátane onkologických ochorení. V tejto štúdii sme zamýšľali objaviť nové inhibítory skríningom malých knižníc heterocyklických molekúl, ako sú pyrolo[3,2-b]pyrolové deriváty s hydrazidovou (molekula 1) alebo hydrazónovou (molekuly 2-6) skupinou viažúcou železo a chelátory železa na báze hydrazónu (molekuly 7-10). V rámci tejto štúdie sme použili rôzne analytické a biochemické techniky na účely charakterizácie nových terapií rakoviny založených na inhibícii TET1 proteínu. Absorbancia a komplexácia testovaných zlúčenín s iónmi Fe(II) bola študovaná UV- Vis spektroskopiou. Inhibícia TET1 proteínu bola študovaná fluorometrickým testom na báze ELISA a ďalej podporená termoporézou v mikromeradle a in silico dokovaním. Cytotoxicita testovaných molekúl na rakovinových bunkových líniách bola meraná testom MTT a intracelulárna distribúcia bola stanovená zobrazovaním živých buniek. Táto štúdia predstavuje biochemickú analýzu potenciálnych inhibítorov TET1 proteínu a prináša významné poznatky, ktoré by mohli viesť k objavu inovatívnej protirakovinovej liečby založenej na...

EN The objective of this work was to study novel synthetic iron chelators and to study their potential use in inhibition of TET1 (ten-eleven translocation methylcytosine dioxygenase 1) protein. Epigenetic mechanisms, such as hydroxymethylation of DNA, are promising target in many serious pathologies, including oncological disorders. In the presented study, we intended to discover novel inhibitors by screening small libraries of heterocyclic molecules, such as pyrrolo[3,2-b]pyrrole derivatives with hydrazide (compound 1) or hydrazone (compound 2-6) iron-binding group and hydrazone-based iron chelators (compound 7-10). Within the scope of this study, we used various analytical and biochemical techniques for the purpose of characterization of novel cancer therapies based on TET1 protein inhibition. The absorbance and the complexation of tested compounds with Fe(II) ions was studied by UV-Vis spectroscopy. Inhibition of TET1 protein was studied by fluorometric assay based on ELISA and further supported by microscale thermoporesis and in silico docking. The cytotoxicity of compounds on cancer cell lines was measured by MTT assay and intracellular distribution was determined by live-cell imaging. This study presents a biochemical analysis of potential TET1 protein inhibitors and brings significant...