Zapojení receptorů spřažených s G proteiny v regulaci odpovědi na poškození DNA

Abstract

This thesis focuses on the role of G protein coupled receptors (GPCRs) in the regulation of the DNA damage response (DDR). DNA is constantly exposed to various factors that can damage it, and effective repair of this damage is crucial for maintaining cellular integrity and preventing mutations that can lead to cancer. GPCRs are a large family of cell surface receptors that regulate a variety of physiological processes through G protein-mediated signaling. This work investigates how activation of the TRH receptor (TRH-R), a member of the GPCR family, can affect the DNA repair process and the potential mechanisms by which these receptors can modulate DDR. In the practical part of this thesis, we focused on the complexes formed by the 53bp1 protein with its binding partners (mainly MDC1 and NBS1) upon activation of TRH receptors and reduced amounts of β-arrestin 2. For this goal, it was necessary to optimize the procedures of fractionation and immunoprecipitation and to verify the efficiency of transfection using siRNA against β-arrestin 2. We achieved the set goals by using various biochemical and molecular biological methods. During fractionation, the detection of proteins using 1D- electrophoresis and immunoblotting served us as a check for the efficient division of cell compartments....

Tato bakalářská práce se zabývá úlohou receptorů spřažených s G proteiny (GPCR) v regulaci reakce na poškození DNA (DDR). DNA je neustále vystavena působení různých faktorů, které ji mohou poškodit, a účinná oprava tohoto poškození je klíčová pro zachování buněčné integrity a prevenci mutací, které mohou vést ke vzniku rakoviny. GPCR jsou velkou rodinou receptorů na povrchu buněk, které regulují řadu fyziologických procesů prostřednictvím signalizace zprostředkované G proteiny. Tato práce zkoumá, jak může aktivace TRH receptoru (TRH-R), který patří mezi GPCR, ovlivnit proces opravy DNA a jaké jsou potenciální mechanismy, kterými mohou tyto receptory modulovat DDR. V praktické části této bakalářské práce jsme se zaměřili na komplexy proteinu 53bp1 s jeho vazebnými partnery (především MDC1 a NBS1) po aktivaci TRH receptorů a sníženého množství β-arrestinu 2. Pro tento cíl bylo nezbytné optimalizovat postupy frakcionace a imunoprecipitace a ověřit účinnost transfekce pomocí siRNA proti β-arrestinu 2. Stanovených cílů jsme dosáhli použitím různých biochemických a molekulárně-biologických metod. Při frakcionaci nám jako kontrola účinnosti rozdělení buněčných kompartmentů sloužila detekce proteinů pomocí 1D-elektroforézy a imunoblotu. Protein-proteinové interakce byly sledovány pomocí metod jako...