Produkce rozpustné formy lidského NK buněčného receptoru NKR-P1 a jeho ligandu LLT1

Abstract

This bachelor's thesis focuses on the preparation of a soluble form of the NKR-P1 human natural killer cell receptor and its ligand LLT1. NK cells play a crucial role in the immune system, with the NKR-P1 receptor and its ligand LLT1 being important molecules in regulating their activity. The aim of this work was to express and purify these two proteins in a soluble form. The thesis describes the successful production and purification of the soluble form of the NKR-P1 receptor and its ligand LLT1. Subsequently, these proteins will be used for the production of specific nanobodies, which will be labeled with fluorescent markers. Fluorescently labeled nanobodies will enable detailed study of the interactions between NKR-P1 and LLT1 at the single-molecule level using super-resolution microscopy based on single-molecule localization. This approach can provide insights into the mechanisms by which NK cells recognize target cells, which is important for the development of new therapeutic strategies in the treatment of cancer and autoimmune diseases. Keywords: NK cells, NKR-P1, LLT1, HEK293T, piggyBac

Tato bakalářská práce se zaměřuje na přípravu rozpustné formy receptoru NKR-P1 (receptor lidských přirozeně zabíječských buněk) a jeho ligandu LLT1. NK buňky hrají klíčovou roli v imunitním systému, přičemž receptor NKR-P1 a jeho ligand LLT1 jsou důležitými molekulami v regulaci jejich aktivity. Cílem této práce bylo exprimovat a purifikovat tyto dva proteiny v rozpustné formě. Práce popisuje úspěšnou produkci a purifikaci rozpustné formy receptoru NKR-P1 a jeho ligandu LLT1. Následně budou tyto proteiny využity pro produkci specifických nanoprotilátek, které budou označeny fluorescenčními markery. Fluorescenčně značené nanoprotilátky umožní detailní studium interakcí mezi NKR-P1 a LLT1 na úrovni jednotlivých molekul pomocí mikroskopie s vysokým rozlišením založené na lokalizaci jedné molekuly. Tento přístup může přinést poznatky o mechanismech, kterými NK buňky rozpoznávají cílové buňky, což je důležité pro vývoj nových terapeutických strategií v léčbě rakovinných a autoimunitních onemocnění. Klíčová slova: NK buňky, NKR-P1, LLT1, HEK293T, piggyBac