Vývoj a validace SLE metody pro úpravu plasmy před UHPLC-MS/MS analýzou pro stanovení steroidů

Abstract

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department: Department of Analytical Chemistry Candidate: Dominika Dubecová Supervisor: PharmDr. Kateřina Plachká, Ph.D. Consultant: Mgr. Taťána Gazárková Title of the diploma thesis: Development and validation of SLE method for plasma retreatment prior UHPLC-MS/MS analysis for the determination of steroids Accurate and reliable determination of endogenous steroid concentrations is an essential part of research into many biological questions. The aim of this work was to develop a sample preparation method that will be subsequently used for the analysis of mouse plasma samples to monitor the effect of acute and chronic stress on the plasma concentration of selected steroid hormones. The set of analysed steroids was compiled based on the requirements of the Institute of Physiology of the Academy of Sciences of the Czech Republic; which carried out the biological experiments. This diploma thesis focused on the development and optimalization of a sample preparation method for the analysis of 38 steroid hormones; which were subsequently analysed using ultra-high-performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS). Two sample preparation methods were compared within this thesis: protein precipitation (PP) and...

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra analytické chemie Kandidát: Dominika Dubecová Školiteľ: PharmDr. Kateřina Plachká, Ph.D. Konzultant: Mgr. Taťána Gazárková Názov diplomovej práce: Vývoj a validace SLE metody pro úpravu plasmy před UHPLC-MS/MS analýzou pro stanovení steroidů Presné a spoľahlivé stanovenie koncentrácií endogénnych steroidov je nevyhnutnou súčasťou výskumu mnohých biologických otázok. Cieľom tejto práce bolo preto vyvinúť metódu prípravy vzorky, ktorá bude následne použitá pre analýzu vzoriek myšej plazmy s cieľom sledovať vplyv akútneho a chronického stresu na plazmatické koncentrácie vybraných steroidných hormónov. Set analyzovaných steroidov bol preto zostavený na základe požiadaviek Fyziologického Ústavu Akadémie vied Českej republiky, ktorý vykonával biologické experimenty. Táto práca sa venovala vývoju a optimalizácii metódy prípravy vzorky pre analýzu 38 steroidných hormónov, ktoré boli následne profilované/kvantifikované za použitia ultra- vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie v spojení s tandemovou hmotnostnou spektrometriou (UHPLC-MS/MS). V rámci diplomovej práce boli porovnávané dve metódy prípravy vzorky: proteínová precipitácia (PP) a extrakcia z kvapaliny do kvapaliny s využitím inertného nosiča (SLE). V rámci optimalizácie...