Analýza insulinu a jeho vybraných analogů v biologických vzorcích pomocí kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí

Abstract

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Dominika Krestová Školitel: prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Konzultant: Mgr. Pavel Šištík, Ph.D. Název diplomové práce: Analýza insulinu a jeho vybraných analogů v biologických vzorcích pomocí kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí Cílem této diplomové práce bylo vyvinout rychlou, jednoduchou, specifickou a citlivou metodu pro stanovení insulinu a jeho vybraných analogů aspart, lispro, glulisin, glargin, detemir a degludek v biologické matrici, konkrétně v plasmě. Insulin je hormonálně aktivní peptid podílející se na udržování stálé koncentrace glukózy v krvi. Insulin se spolu s jeho strukturními analogy využívá pro léčbu onemocnění diabetes mellitus. Limitujícím faktorem při analýze těchto látek je jejich nestabilita a velmi nízká koncentrace v lidských vzorcích krve, která se pohybuje v řádech pg/ml. Vývoj metody zahrnoval optimalizaci parametrů hmotnostní spektrometrie (MS) pro detekci jednotlivých analytů a optimalizaci ultravysokoúčinné kapalinové chromatografie (UHPLC) pro separaci všech analytů. Testovány byly dva systémy, a to 1D (jednorozměrná) a 2D (dvourozměrná) UHPLC, ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií (MS/MS) s využitím trojitého kvadrupólu (QqQ). Jako iontový...

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department od Analytical Chemistry Candidate: Bc. Dominika Krestová Supervisor: prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Consultant: Mgr. Pavel Šištík, Ph.D. Title of Diploma Thesis: Analysis of insulin and its selected analogues in biological samples by liquid chromatography with mass spectrometry detection The aim of this thesis was to develop a rapid, simple, specific and sensitive method for the determination of insulin and its selected analogues aspart, lispro, glulisine, glargine, detemir, and degludec in biological matrix, namely plasma. Insulin is a hormonally active peptide involved in maintaining a stable blood glucose concentration. Insulin, together with its structural analogues, is used for the treatment of diabetes mellitus. A limiting factor in the analysis of these substances is their instability and very low concentration in blood samples, which is in the order of pg/ml. Method development included optimization of mass spectrometry (MS) parameters for the detection of individual analytes and optimization of ultra-high performance liquid chromatography (UHPLC) to ensure separation of the analytes. Two systems, namely 1D (one dimensional) and 2D (two dimensional) UHPLC, were tested in coupling with tandem mass spectrometry using...