Charakterizace afinitního páru antigen-protilátka pomocí metody affiblot

Abstract

The theoretical part describes the basic characteristics of antigens and antibodies, including their structure and functions. The different classes of antibodies are also presented along with the process of antibody production in the human body. Additionally, various methods of antibody preparation or production are explained, such as monoclonal, polyclonal, and recombinant antibodies for diagnostic purposes, with their advantages and disadvantages evaluated. The use of antibodies in diagnostics and therapy is summarized, and the significance of the affinity interaction between antigen and antibody is explained, along with the use of magnetic particles in diagnostics. The following chapters mention selected methods used for the characterization of affinity pairs, particularly immunoblotting techniques such as Dot blot, Affiblot, and Western blot, as well as immunoenzymatic methods like ELISA. The experimental part contains the results obtained from Affiblot version 3.5.2 to verify the functionality of the model antigen-antibody system (human IgG and its detection antibodies or conjugates) and to optimize the detection method. Two detection methods, colorimetric and chemiluminescent were tested and compared. In the next phase, two different membranes were tested to determine their impact on the...

V teoretická části je popsána základní charakteristika antigenů a protilátek, včetně jejich struktury a funkcí. Dále jsou uvedeny třídy protilátek spolu s tvorbu protilátek v lidském organismu. Taktéž jsou objasněny různé možnosti přípravy či výroby protilátek, jako jsou monoklonální, polyklonální a rekombinantní protilátky pro diagnostické účely. Jsou zde zhodnoceny jejich výhody i nevýhody. Shrnuto je rovněž využití protilátek v diagnostice a v terapii, stejně tak je vysvětlen význam afinitní interakce mezi antigenem a protilátkou a použití magnetických částic v diagnostice. V následujících kapitolách jsou zmíněny vybrané metody, které se používají pro charakterizaci afinitních párů, zejména imunoblottovací techniky jako jsou Dot blot, Affiblot a Western blot, ale také imunoenzymatické metody jako je např. ELISA. V experimentální části se nacházejí výsledky získané z affiblotu verze 3.5.2. za účelem ověření funkčnosti modelového systému antigen-protilátka (lidské IgG a jeho detekční protilátky či konjugáty) a optimalizace metody jejich detekce. Byly testovány a porovnány dvě metody detekce kolorimetrická a chemiluminiscenční. V další fázi byly testovány dvě různé membrány, aby se určil jejich vliv na přesnost a citlivost měření. Důležitou částí experimentů bylo ověření modelového systému...