Nové metody pro diagnostiku poruch krvetvorby.

Abstract

Nové metody pro diagnostiku poruch krvetvorby Abstrakt Detekce přestaveb genů pro imunoglobuliny (Ig) a T-buněčné receptory (TR) hraje klíčovou roli při stanovení minimální reziduální nemoci (MRN) u hematologických malignit. Hlavním cílem této práce bylo vyvinout a validovat metodu pro detekci MRN a současné stanovení repertoáru přestaveb Ig/TR fyziologických lymfocytů pomocí sekvenování nové generace (NGS). Srovnání hladin MRN detekovaných pomocí současné standardní metody kvantitativní PCR v reálném čase (qPCR) a nové metody NGS u souboru 458 pacientů s akutní lymfoblastickou leukémií ukázalo, že NGS je specifičtější metodou, která umožní stratifikovat více pacientů do skupiny s nízkým rizikem relapsu, a tím snížit intenzitu a toxicitu léčby. Navzdory těmto výsledkům zůstává qPCR standardem v léčebných protokolech, a to především z ekonomických důvodů. Porovnáním s výsledky NGS bylo možné upřesnit interpretační kritéria pro vyhodnocení nízce pozitivních výsledků MRN získaných pomocí qPCR. Tato kategorie hodnot bude nově rozdělena na dvě podskupiny: MRN s nízkou pozitivitou a MRN s nejistou signifikancí. Nová pravidla pro interpretaci budou zavedena do klinického použití v roce 2025 a ovlivní laboratoře v 27 zemích. Metoda NGS byla dále využita k analýze klonality repertoáru TR u pacientů s anaplastickým...

New methods for the diagnosis of hematopoietic disorders Abstract Identification of immunoglobulin (Ig) and T-cell receptor (TR) gene rearrangements plays a crucial role in the detection of minimal residual disease (MRD) in hematologic malignancies. The main objective of this study was to develop and validate a method for MRD detection and simultaneously analyze the Ig/TR repertoire of physiological lymphocytes using next-generation sequencing (NGS). A comparison of MRD levels detected using the current standard method, real-time quantitative PCR (qPCR), and the new NGS method in a cohort of 458 patients with acute lymphoblastic leukemia demonstrated that NGS is more specific. NGS also enables the stratification of more patients into the low-risk relapse group, thereby reducing treatment toxicity and intensity. Despite these findings, qPCR remains the standard method in treatment protocols, mainly because of economic reasons. Comparison with NGS results enabled redefinition of criteria for evaluating low positive MRD results obtained using qPCR. This category will be divided into two subgroups now: low positive MRD and MRD of uncertain significance. The new guidelines will be implemented in clinical practice in 2025, impacting laboratories across 27 countries. The NGS method was further employed to analyze...