Dual role of CD9 protein in mast cell activation

Abstract

Žírne bunky sú známe efektorové bunky imunitného systemu. Ich účasť bola preukázaná v takých dôležitých procesoch ako sú obrana hostiteľa pred baktériami, toxínmi alebo parazitmi. Niekedy však môžu vytvárať neprimeranú reakciu proti neškodným antigénom v našom prostredí a spôsobovať tak alergie. Je práve preto vrcholne dôležité pochopiť signálne deje, ktoré vedú k aktivácii týchto buniek, za účelom vyvýjania nových stratégii liečby. Novovytvorená potkania monoklonálna protilátka izotypu IgG1, špecifická proti myším žírnym bunkám, bola charakterizovaná ako vhodná pre použitie v prietokovej cytometrii, imunoznačení a imunoprecipitácii. Použitie optimalizovaného postupu imunoizolácie v spojení s hmotnostnou spektrometriou umožnilo identifikovať CD9 ako jej cieľový proteín. CD9 je členom rozsiahlej rodiny nazývanej "tetraspanins". Funkčné štúdie ukázali, že väzba tejto protilátky na žírne bunky spôsobila degranuláciu a aktiváciu včasných dejov ako sú zvýšená tyrozínová fosforylácia a zvýšená hladina voľného cytoplazmatického vápnika. Prekvapivé bolo zistenie že, následná aktivácia týchto buniek cez agregáciu FcεRI receptoru pomocou antigénu viedla naopak ku zníženej degranulácii, vápnikovej odpovedi a tyrozínovej fosforylácii niekoľkých substrátov. Anti-CD9 protilátka však neinhibovala tieto bunkové odpovede,...

Mast cells are well known effector cells in immune system. They have been implicated in such important processes as host defense against bacteria, toxins or parasites. However, in some cases they can develop improper reaction against harmless environmental antigens and thus causing allergies. It is therefore essential to understand signaling events that lead to activation of these cells in order to develop new treatment strategies. Newly prepared rat monoclonal antibody of IgG1 subtype raised against murine mast cells was characterized and found suitable for flow cytometry, immunoblotting and immunoprecipitation. Employing of optimized procedure for immunopurification in combination with mass spectrometry led to identification of its target cluster of differentiation (CD)9 protein. CD9 is a member of large protein family called tetraspanins. Functional studies showed that binding of this antibody to mast cells induced degranulation and early activation events such as increased tyrosine phosphorylation and enhanced levels of free cytoplasmic calcium. Interestingly, subsequent activation of these cells via antigen-mediated aggregation of the high-affinity IgE receptor (FcεRI) led to decreased degranulation, calcium response and tyrosine phosphorylation of several substrates. Importantly, anti-CD9 antibody did...