Vývoj bioanalytické metody pro studium úlohy pyridoxal isonikotinoyl hydrazonu při intoxikaci izoniazidem

Abstract

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie je v oblasti stanovení léčiv z biologického materiálu jednou z nejpoužívanějších separačních metod. Je vhodná ke kvantitativní i kvalitativní analýze léčiv. Isoniazid se používá jak k léčbě, tak i k prevenci tuberkulózy. Předávkování isoniazidem zpřusobuje neurotoxicitu. Akutní intoxikace isoniazidem se projevuje tonicko-klonickými křečemi centrálního přuvodu. Jako antidotum se v klinické praxi podává vitamín B6 (pyridoxin). Přestože je zřejmé, že je tento druh toxicity spojen s deficitem vitaminu B6 (respektive jeho aktivní formy pyridoxal-5-fosfátu - PLP), konkrétní dřukazy o mechanismech a dějích, které jsou za tento jev zodpovědné, stále chybí. Cílem pilotní studie bylo vypracovat chromatografické podmínky, vhodné pro monitorování intoxikace isoniazidem a detekci případných hydrazonových metabolitř u. Tyto podmínky by měly umožnit separaci sedmi analytřu (isoniazid, acetylisoniazid, pyridoxal, pyridoxol, pyridoxal-5-fosfát, PIH a o-108 - vnitřní standard). Dále pak bylo cílem studovat možnosti izolace všech uvedených látek z králičí plazmy. Nejlepší chromatografická separace byla dosáhnuta použitím kolony LiChroCART 250 × 4 nm I.D., s náplní Lichrospher 100 RP-18 (5 µm)....

High-performance liquid chromatography is one of the most frequently used separation methods for an analysis of drugs in biological material. It is suitable both for quantitative and qualitative drug analysis. Isoniazid is used for the treatment and a prevention of tuberculosis. Acute isoniazid intoxication is manifested by tonic-clonic convulsions. Vitamine B6 (pyridoxine) is used in clinical practice as an antidotum. Although this type of toxicity is considered to be associated with the deficiency of vitamine B6 (or its active form, pyridoxal-5-phosphate - PLP), description of mechanisms and processes, which are responsible for this effect, is still missing. The aim of this study was to develop suitable chromatographic conditions for monitoring intoxication by isoniazid and detection of potential hydrazone metabolites. These conditions should allow a separation of seven analytes (isoniazid, acetylisoniazid, pyridoxal, pyridoxol, pyridoxal-5-phosphate, and the o-108 - internal standard). Furthermore, the aim was to study possibilities of isolating all those substances from rabbit plasma. The best chromatographic separation was achieved using the HPLC column LiChroCART 250 × 4 nm I.D., packed with Lichrospher 100 RP-18 (5 µm). The mobile phase was composed of a buffer - component A (NaH2PO4 0.01 mol/l, with...