Vznik karbonylových skupin vlivem neenzymové glykace proteinů

Abstract

Vypracovala: Lenka Krautová Místo vypracování: Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Název: Vznik karbonylových skupin vlivem neenzymové glykace proteinů Školitel: PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Tato diplomová práce byla zaměřena na optimalizaci stanovení množství karbonylových skupin v biologickém materiálu. Karbonylové skupiny vznikají vlivem oxidace nebo glykace proteinů. Jako modelovou bílkovinu pro spektrofotometrickou metodu stanovení jsem použila bovinní sérový albumin a pro elektroforetickou metodu aspartátaminotransferázu, které jsem glykovala několika glykačními činidly (glukóza, glukóza + měď, fruktóza, fruktóza + měď, metylglyoxal). U spektrofotometrického stanovení jsem optimalizovala různé parametry: rozpouštědlo, koncentraci činidla, množství bílkoviny a délku inkubace. Podařilo se mi nalézt vhodné podmínky stanovení, které jsem používala v dalších experimentech s různými glykačními činidly. U elektroforetického stanovení jsem prováděla SDS-PAGE s následným barvením stříbrem nebo imunobloting s chemiluminiscenční detekcí. Výsledky spektrofotometrického stanovení ukázaly, že nejvyšší glykační schopnost má metylglyoxal, následuje fruktóza s přídavkem měďnatých iontů, samotná fruktóza, glukóza s přídavkem měďnatých iontů a nejpomalejším glykačním činidlem je...

Author: Lenka Krautová Publishing place: Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Title: Formation of carbonyl compounds by non-enzymatic protein glycation Supervisor: PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. This diploma thesis was aimed at the optimization of carbonyl groups determination in biological material. Carbonyl groups are formed by effect of protein oxidation or glycation. As a model protein, I used bovine serum albumin for spectrophotometric and aspartate aminotransferase for electrophoretic method of assessment, which were glycated by several glycating agents (glucose; glucose + copper; fructose; fructose + copper; methylglyoxal). I optimized different parameters of spectrophotometric determination: solvent, concentration of reagent, amount of protein, and duration of incubation. I managed to find suitable conditions of this determination, which I have used in subsequent experiments with different glycating agents. At electrophoretic determination, I performed SDS-PAGE with following silver staining or immunoblotting with chemiluminescent detection. The results of spectrophotometric determination showed that methylglyoxal has the highest glycating ability, followed by fructose with addition of cupric ions, fructose itself, glucose with addition of cupric ions, and the...