Studium metabolizmu v in vitro kulturách Cannabis sativa L.

Abstract

I. Závěr Z dostupných informačních zdrojů byl vypracován přehled obsahových látek rostliny Cannabis sativa L. se zaměřením na jejich biologickou aktivitu. Dále bylo zpracováno téma biotechnologické kultivace tkáňových kultur a aplikace moderních instrumentálních analytických metod v rámci rozvíjející se disciplíny metabolomiky. Na základě NMR a MS výsledků nebyly detekovány kanabinoidy v kontrolních nebo elicitovaných suspenzních kulturách Cannabis sativa L.. Také ostatní sekundární metabolity nebyly zaznamenány pomocí NMR. Pro úplné vyhodnocení ostatních sekundárních metabolitů, pokud byly přítomny, by bylo nezbytné využít citlivější analytické metody a jejich kombinace. Lze shrnout, že v suspenzních, kalusových a embryonálních kulturách Cannabis sativa L. nebyla s využitím elicitace pektinem nebo jasmonovou kyselinou stimulována biosyntéza kanabinoidů. Na základě kvantifikace produkovaných sloučenin a sestrojených růstových křivek byly vyhodnoceny metabolity jednotlivých růstových fází. S využítím statistické metody PCA byly vyhodnoceny důsledky elicitací s návazností na identifikaci případně objasnění struktury metabolitů. Bylo identifikováno maximum možných signálů 1 H NMR spekter a objasněny struktury u neznámých sloučenin s využitím 2D NMR. Výsledky získané z NMR měření a PCA analýz předkládají...

I. Summary The literature review concerning Cannabis sativa L. was prepared with focus on the biologically active compounds. The scope of cell cultures biotechnology and application of modern instrumental analytical methods in the field of metabolomics was discussed. Based on the NMR and MS results, no cannabinoids were detected in the control or elicited cell suspension cultures of Cannabis sativa L. Also other secondary metabolites were not detected by NMR. Other more sensitive analytical methods and their combinations should be used for absolute evaluation of other secondary metabolites, if they are present. It can be concluded, that biosynthesis of the cannabinoids was not induced by pectin or jasmonic acid as elicitors in the suspension, callus or embryogenic tissue cultures of Cannabis sativa L. Main metabolites of certain growt phases were evaluated based on the quantification of produced metabolites and prepared growth phase curves. The impacts of elicitations were interpreted by PCA statistical method, with subsequent metabolite identification or structure elucidation. Maxima of possible 1 H NMR signals were identified and 2D NMR experiments were applied for signals of unknown compounds. The results from NMR measurements combined with PCA analysis brought comprehensive picture of the cultures'...