Příprava a charakterizace lidských buněčných kofaktorů retrovirové integrace

Abstract

LEDGF/p75 je lidský buněčný vazebný partner integrasy viru HIV-1. Jak prokázaly nedávné studie, LEDGF/p75 hraje zásadní roli v replikačním cyklu tohoto viru. Jeho funkce v procesu retrovirové integrace je velice dobře prostudována. Byla identifikována doména zodpovědná za interakci s virovou integrasou (IBD) a byly provedeny strukturní studie, které poskytly detailní informace o této interakci. Ostatní jeho úlohy však zatím příliš charakterizovány nejsou. Je jisté, že jako transkripční faktor zasahuje nejen do replikace viru HIV-1, ale také do procesů spojených s buněčným stresem, autoimunity a rozvoje některých druhů rakoviny. Dodnes bylo odhaleno několik přirozených vazebných partnerů LEDGF/p75, jejichž vazba na tento protein je zprostředkovávána stejnou doménou jako vazba intergasy viru HIV- 1; jedním z nich je i protein PogZ. Bylo prokázáno, že vzájemná interakce LEDGF/p75 a PogZ je u obou těchto proteinů zajištěna jejich C-koncovými úseky. Abychom získali informace o této interakci a o topologii vazebných míst LEDGF/p75 a PogZ, rozhodli jsme se provést strukturní studii jejich vazebných domén. Tato strukturní studie je zásadní pro pochopení přirozené buněčné funkce LEDGF/p75 a může pomoci ve vývoji inhibitoru specificky blokujícího interakci LEDGF/p75 a virové integrasy, aniž by došlo k narušení...

Lens epithelium-derived growth factor/p75 (LEDGF/p75) is a prominent cellular binding partner of Human Immunodeficiency Virus type 1 (HIV-1) integrase. It is a human nuclear protein, which has been implicated in transcriptional regulation and cell survival. The role of LEDGF/p75 in HIV integration is well characterized, the HIV integrase binding domain (IBD) was identified and structural studies, which provide detail information about this interaction, were done. However, very little is known about its physiological function. As a transcriptional co-activator, LEDGF/p75 is implicated not only in HIV replication, but also in human cancer and autoimmunity. Key feature for both, the viral and cellular role of this protein, is its ability to act as a molecular adaptor tethering proteins to the chromatin fiber. Recently, PogZ (Pogo transposable element derived protein with zinc finger domain) was identified and validated as a new cellular interaction partner of LEDGF/p75. It was shown, that their interaction is mediated by IBD of LEDGF/p75 and the C-terminal domain of PogZ. To gain more insight in this interaction, we have initiated structural studies of their complex. Structural information is crucial for understanding the LEDGF/p75 biological role and might help in design of inhibitors selectively blocking...