Exprese a purifikace kinasove domény ASK1 kinasy.

Abstract

Cílem této diplomové práce bylo nalezení optimálních podmínek pro expresi ASK1 kinasy v prokaryotním expresním systému a vývoj purifikačního protokolu umožňujícího přípravu miligramových množství stabilního a rozpustného proteinu. Byly otestovány různé podmínky exprese v bakteriích E. coli s různou teplotou exprese, složením kultivačního média či momentu provedení indukce. Při přípravě purifikačního protokolu byly testovány různé metody purifikace proteinů. Finální protokol je založen na kombinaci chelatační chromatografie a následné gelové permeační chromatografie. Výsledkem diplomové práce je protokol umožňující přípravu 1 mg čisté kinasy ASK1 z 1 litru média.

The goal of this diploma thesis was to find optimal conditions for expression of ASK1 kinase in prokaryotic expression system and to optimize purification protocol which enables preparing of milligram amounts of stable and soluble protein. Different conditions of expression were tested in E. coli cells including temperature of expression, cultivation medium or the length of induction. Different methods of purification were tested during the development of the purification protocol. The final protocol is based on chelate chromatography followed by gel permeation chromatography. The result of the diploma thesis is a protocol that allows preparing 1 mg of pure ASK1 kinase from 1 liter of medium.