Biochemická a funkční charakterizace nového transmembránového adaptorového proteinu NVL

Abstract

Signalizační dráhy spouštěné v imunologické synapsi z T buněčného receptoru (TCR) již byly v minulosti podrobně studovány. Oproti tomu o dráhách účastnících se přenosu signálů spouštěných v této struktuře z MHCII na profesionálních antigen prezentujících buňkách (APC) se toho ví stále velmi málo. Transmembránové adaptorové proteiny (TRAP) jsou rodinou proteinů, která hraje důležitou roli v signalizaci iniciované T receptorem a jinými imunoreceptory. Dosud však nebyl popsán žádný TRAP účastnící se signalizace přes MHCII. Tato práce popisuje nový TRAP nazvaný Nvl, který je vysoce obohacen v imunologické synapsi na straně antigen prezentujících buněk a účastní se regulace přenosu signálu z MHCII a FcR. Nvl je přítomný výlučně v profesionálních antigen prezentujících buňkách - B buňkách, monocytech/makrofázích a dendritických buňkách, a míra jeho exprese pozitivně koreluje s expresí MHCII. Nvl se nachází v tetraspanových mikrodoménách a spolu s tetraspany je lokalizován v polarizovaných buněčných strukturách, včetně uropodu, zaškrcení při buněčném dělení (cleavage furrow) a též do imunologické synapse. Přítomnost Nvl v imunologické synapsi naznačuje možnou účast Nvl na přenosu signálů spouštěných z MHCII. Nvl je skutečně fosforylován po stimulaci přes MHCII, avšak silná fosforylace Nvl byla pozorována...

In T cells, signalling events initiated at the immunological synapse by T cell receptor (TCR) have been already thoroughly studied. In contrast, signalling pathways involved in MHCII-mediated signal transduction on the APC side of this structure are still rather poorly understood. Transmembrane adaptor proteins (TRAPs) are a class of proteins with an essential role in signalling triggered by TCR and other immunoreceptors. So far no TRAPs involved in MHCII signalling have been identified. In this work a new TRAP, highly enriched in the immunological synapse in APCs is described and termed Nvl. Nvl is expressed exclusively in professional antigen presenting cells - B cells, monocytes/macrophages and dendritic cells, and the level of its expression positively correlates with the expression of MHCII. Nvl is present in tetraspanin microdomains and together with tetraspanins it is localized to the polarized structures of the cell, including uropod, cleavage furrow, and, most interestingly, the immunological synapse. The presence in the immunological synapse indicates possible role for Nvl in MHCII- mediated signal transduction. Indeed, Nvl becomes tyrosine-phosphorylated after stimulation via MHCII, although strong phosphorylation has also been observed after FcγR stimulation or treatment with...