Analýza pigmentů z integumentu Graphosoma semipunctatum.

Abstract

Pteriny patří do důležité skupiny látek, fungující jako pigmenty u řady druhů živočichů. Některé z nich jsou pravděpodobně zodpovědné za charakteristické zbarvení skupiny hmyzu. Toto zbarvení funguje jako varovný signál pro vizuálně se orientující predátory (ptáky, ještěrky aj.). Tato práce byla zaměřena na vývoj HPLC separační metody pro analýzu pterinů, obsažených v Graphosoma semipunctatum. Pro vývoj metody byl zvolen reverzní separační mód s C18 stacionární fází (Spherisorb ODS 2) a binární mobilní fází (organický modifikátor/fosfátový pufr nebo voda). V rámci optimalizační procedury byl sledován vliv typu a obsahu organického modifikátoru (methanol, ethanol, tetrahydrofuran) a koncentrace fosfátového pufru, pH 3,0 (10 - 30 mM) v mobilní fázi na retenční a separační chování studovaných pterinů (leukopterin, biopterin, xanthopterin, isoxanthopterin a erythropterin). Za optimalizovaných separačních podmínek (5/95 (v/v) methanol/20 mM fosfátový pufr, pH 3,0, průtoková rychlost 0,7 ml.min-1 , UV detekce při 290 nm) byl analyzován extrakt z integumentu ploštice Graphosoma semipunctatum.

Pterines belong to an important group of compounds, acting as pigments in many species. Some of them are probably responsible for characteristic coloration of the insect group (Hereroptera). This coloration is considered to be a visual warning signal for optically orientating predators (birds, lizards etc.). In this work, pterines in the species of Graphosoma semipunctatum have been investigated by high performance liquid chromatography. To develope an appropriate separation method, the reverse-phase separation mode with C18 stationary phase (Spherisorb ODS 2) and binary mobile phase (organic modifier/buffer or water) was used. The effect of type and content of organic modifiers (methanol, ethanol, tetrahydrofuran) and concentration of phosphate buffer pH 3.0 (10 - 30 mM) in the mobile phases on retention and separation behavior of the studied pterines (leukopterin, biopterin, xanthopterin, isoxanthopterin and erythropterin) was studied. Under the optimized separation conditions (5/95 (v/v) methanol/20 mM phosphate buffer, pH 3.0, flow rate 0.7 ml.min-1 , UV detection at 290 nm), the extract from the integument of Graphosoma semipunctatum was analyzed.