Charakterizace pre-Sertoliho buněk Xenopus tropicalis ve tkáňové kultuře

Abstract

4 Abstrakt Xenopus tropicalis je významným modelovým organismem vývojové i buněčné biologie. Dlouhodobá primární smíšená buněčná kultura získaná z juvenilních varlat Xenopus tropicalis, je první tkáňovou kulturou u tohoto živočišného druhu. Její charakterizace je důležitá pro další práci a ní a následné pokusy. Kultura je tvořena prekurzory Sertoliho buněk. Podpůrná vrstva těchto buněk umožňuje dlouhodobou kultivaci zárodečných kmenových buněk. Významnou roli při kultivaci představuje vliv kondicionovaného média na proliferaci buněk. Výsledky této práce prokázaly vliv kondicionovaného média na růst tkáňové kultury. Analýza genové exprese buněk kultury a varlat odhalila, že v procesu diferenciace Sertoliho buněk je zapojena celá řada růstových a diferenciačních faktorů. Přítomnost markerových genů byla prokázána RT-PCR a in situ hybridizací. Tento in vitro systém může pomoci k objasnění rozdílných rolí pre-Sertoliho a Sertoliho buněk v diferenciaci varlat. Představuje tak nový model spermatogeneze umožňující oddělení části diferenciace pre-Sertoliho a Sertoliho buněk, které lze u savčích modelů oddělit jen s obtížemi. Klíčová slova: Xenopus tropicalis, tkáňová kultura, pre-Sertoliho buňky, Sertoliho buňky, diferenciace varlat, genová exprese

5 Abstract Xenopus tropicalis is an important model organism used in developmental and cell biology. Long term primary mixed cell culture, derived from juvenile testis of Xenopus tropicalis, is the first tissue culture of this specie. Characterization of this tissue culture is important for its further handling and subsequent experiments. The culture is composed of Sertoli cell precursors. Feeder layer of this cells enables long term germinal stem cell cultivation. Influence of condicioned medium plays important role during the cell culture cultivation. Result of this task approved effect of condicioned medium for cell culture growth. Cell culture and testis gene expression analyse revealed, that in process of Sertoli cell differentiation many growth and differentiation factors are involved. Presence of marker genes has been approved by RT-PCR and in situ hybridization. This in vitro system can contribute to clarification of different roles of pre-Sertoli and Sertoli cells in testis differentiation, and therefore it establishes a new spermatogenesis model offering the possibility to distinguish parts of the pre-Sertoli and Sertoli cells differentiation, which is difficult in mammal models. Keywords: Xenopus tropicalis, tissue culture, pre-Sertoli cells, Sertoli cells, testicular differentiation, gene expression