Studium exprese MDR pump u kvasinek Saccharomyces cerevisiae za různých růstových podmínek: metoda s fluorescenční sondou diS-C3(3)
Studium exprese MDR pump u kvasinek Saccharomyces cerevisiae za různých růstových podmínek: metoda s fluorescenční sondou diS-C3(3)
diploma thesis (DEFENDED)
Reason for restricted acccess:
The document or parts thereof are inaccessible in accordance with Article 18a (7) of the Code of Study and Examination in conjunction with Article 10 of the Rector’s Directive No. 6/2010. The full text of the thesis is accessible in the physical database in accordance with Article 18a (5) of the Code of Study and Examination.
View/ Open
Permanent link
http://hdl.handle.net/20.500.11956/36212Identifiers
Study Information System: 76529
Collections
- Kvalifikační práce [10926]
Author
Advisor
Consultant
Hoefer, Milan
Referee
Krůšek, Jan
Faculty / Institute
Faculty of Mathematics and Physics
Discipline
Biophysics and Chemical Physics
Department
Institute of Physics of Charles University
Date of defense
30. 5. 2011
Publisher
Univerzita Karlova, Matematicko-fyzikální fakultaLanguage
English
Grade
Excellent
Keywords (Czech)
membránový potenciál, fluorescenčná sonda, Pdr10p, Pdr15p, H+-ATPázaKeywords (English)
membrane potential, fluorescent probe, Pdr10p, Pdr15p, H+-ATPaseV tejto práci sme študovali dva kvasinkové transportéry z rodiny ABC, Pdr10p a Pdr15p. V čase zadania diplomovej práce sa verilo, že tieto proteíny prispievajú ku kvasinkovému MDR fenotypu (PDR) na základe ich vysokej homológie s iným kvasinkovým MDR proteínom, Pdr5p. Aby sme tieto pumpy mohli študovať, boli pripravené dve izogénne skupiny mutantných kmeňov s deletovanými génmi kódujúcimi tieto proteíny, vo všetkých možných kombináciách delécií. Ukázalo sa, že oba tieto proteíny sú veľmi dôležité pri udržiavaní normálneho mikrookolia plazmatickej membrány pre najhojnejší, a esenciálny, kvasinkový membránový proteín, H+ -ATPázu, a tak ovplyvňujú membránový potenciál. Proteíny Pdr10p a Pdr15p tak hrajú doposiaľ neznámu úlohu pri regulácii tohoto enzýmu. Ďalej sa ukázalo, že delécia génov kódujúcich tieto proteíny výrazne znižuje možnosť aktivácie H+ -ATPázy protonofórom CCCP, ktorý je slabou kyselinou. Štúdie s imunosupresantom FK506 ďalej ukazujú, že táto látka znižuje životaschopnosť mutantného kmeňa S. cerevisiae PLY643, ktorý má deletované gény kódujúce Pdr5p, Snq2p a Yor1p. Ďalšie delécie Pdr10p a Pdr15p nezvyšujú letalitu tejto látky. Ani FK506 ani CCCP nie sú substrátmi študovaných púmp. 1
In this work, we studied two yeast ABC transporters, Pdr10p and Pdr15p. At the time of assignment of this thesis, it was believed that these proteins contribute to the yeast MDR phenotype (PDR) on the grounds of their high homology to another yeast MDR protein, Pdr5p. In order to study these pumps, two sets of isogenic null-mutant strains were prepared with all possible combinations of gene deletions. We report that both of the studied proteins are very important in sus- taining the normal plasma membrane microenvironment for the most abundant, and essential, yeast plasma membrane protein, H+ -ATPase and so influence the membrane potential. Pdr10p and Pdr15p thus play an as yet unknown role in reg- ulation of the activity of this enzyme. Furthermore, we report that deletion of the genes coding for these proteins severely reduces the ability of the H+ -ATPase to be activated by the protonophore CCCP which is a weak acid. Studies performed with immunosuppressant FK506 further show that this compound reduces the viability of S. cerevisiae mutant strain PLY643 lacking genes coding for Pdr5p, Snq2p and Yor1p. Further deletion of Pdr10p and Pdr15p does not increase the lethality of this compound. Neither CCCP nor FK506 are substrates of the stud- ied pumps. 1