Monolitní stacionární fáze pro HPLC stanovení biologicky aktivních látek I.

Abstract

DEVELOPMENT AND VALIDATION OF HPLC METHOD FOR DETERMINATION OF RETINYL ESTERS IN HUMAN SERUM USING MONOLITHIC COLUMN Absorption test of vitamin A is used for monitoring of intestinal permeability and may represent a sensitive indicator of intestinal damage. In this study, a simple and rapid reversed- phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) procedure for selective and sensitive determination of retinol, -tocopherol, retinyl-palmitate and retinyl-stearate in blood serum has been developed and used for the monitoring of intestinal mucosal damage in cancer patients treated with cytotoxic drugs after absorption test of vitamin A. The HPLC instrumentation Series 200 LC from Perkin Elmer (Norwalk, USA) with diode- array detector (DAD) was used for the analysis. Separation of retinol, -tocopherol, retinyl- palmitate and retinyl-stearate were performed using the monolithic column Chromolith Performance RP-18e, 100 x 4.6 mm (Merck, Darmstadt, Germany). The gradient elution was used at the flow rate 3 ml min-1 ; mobile phase methanol:water (95:5) in 0-2.1 min and methanol:2-propanol (60:40) in 2.1-4.9 min. The total time of analysis was 6 min. The injection volume of sample was 20 μl and analysis was done at ambient temperature. The detection of retinol, -tocopherol and retinyl esters was carried out...

VÝVOJ A VALIDACE HPLC METODY PRO STANOVENÍ ESTERŮ RETINOLU V LIDSKÉM SÉRU S VYUŽITÍM MONOLITICKÉ KOLONY Retinol absorpční test je využíván pro monitorování absorpce ve střevě a součastně slouží jako citlivý indikátor poškození střevní sliznice. V této práci byla vyvinuta jednoduchá, rychlá HPLC metoda pro stanovení retinolu, alfa-tokoferolu, retinyl palmitátu a retinyl stearátu v krevním séru. Tato metoda je využívána pro monitorování poškození střevní sliznice cytotoxickými léčivy po retinol absorpčním testu u pacientů s onkologickým onemocněním. Pro vývoj metodiky byla použita HPLC sestava 200LC Perkin Elmer (Norwalk, USA) s detektorem diodového pole. Analyty byly separovány na monolitní stacionární fázi Chromolith Performance RP-18e, 100 x 4.6 mm (Merck, Darmstadt, Německo). Látky byly sepoarovány pomocí gradientové eluce s následujícími parametry: Průtok: 3 ml min-1 Mobilní fáze 1 methanol:voda (95:5) v 0-2.1 minutě Mobilní fáze 2 methanol:2-propanol (60:40) v 2.1-4.9 minutě. Celkový čas analýzy: 6 minut Nátřik: 20 μl Teplota: 25žC Retinol byl detekován při 325nm, α-tokoferol při 295nm a estery retinolu při 330nm. Metoda byla kompletně validována.