Vliv exprese SERCA3 na buněčnou diferenciaci u prekurzorových B-buněk akutní lymfoblastické leukémie

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Student: Michal Urban Školitel: Doc. PharmDr. Petr Pávek, PhD Název diplomové práce: Vliv exprese SERCA3 na buněčnou diferenciaci u prekurzorových B-buněk akutní lymfoblastické leukémie V této práci bylo naším cílem prozkoumat propojení mezi kalciovou homeostázou a procesem buněčné diferenciace v prekurzorových B-buňkách akutní lymfoblastické leukémie. Po užití forbol-myristát-acetátu (PMA), známého induktoru buněčné diferenciace, jsme studovali míru exprese kalciových ATPáz v sarkoendoplasmatickém retikulu (tzv. SERCA proteiny), což jsou kalciové pumpy transportující kalcium z cytosolu do endoplasmatického retikula. Pro naše experimenty jsme použili dvě nádorové buněčné linie RCH-ACV a Kasumi-2. Po navození buněčné diferenciace jsme stanovovali míru exprese proteinů SERCA díky Western blotu za použití anti-SERCA monoklonálních protilátek PLIM430 a IID8, které rozpoznávají SERCA2 a SERCA3, což jsou dvě isoformy proteinů SERCA. Naše výsledky ukázaly, že indukce buněčné diferenciace vede ke zvýšení exprese pouze jedné isoformy SERCA3, zatímco exprese SERCA2 zůstává většinou nezměněna. To může naznačovat, že použitý induktor selektivně zvýšil expresi pouze jedné isoformy a tudíž se nabízí využití...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacology & Toxicology Student: Michal Urban Supervisor: Doc. PharmDr. Petr Pávek, PhD Title of diploma thesis: Cellular differentiation analysis using SERCA3 protein expression in precursor B-cell acute lymphoblastic leukaemia In this work our objective was to investigate an interconnection between calcium homeostasis and process of cellular differentiation in precursor B-cell acute lymphoblastic leukaemia cell lines. After using phorbol-myristate-acetate (PMA), a known cell differentiation inducer we studied the expression levels of Sarco-Endoplasmic Reticulum Calcium ATPases (SERCA proteins), calcium pumps which transport calcium from cytosol to endoplasmic reticulum. We used two cancer cell lines RCH-ACV and KASUMI-2 for our experiments. After the induction of cellular differentiation we determined SERCA expression levels by Western blot using PLIM430 and IID8 as anti-SERCA monoclonal antibodies that recognize SERCA2 and SERCA3, two SERCA isoforms. Our results showed that induction of cellular differentiation led only to an increase of SERCA3 expression levels, whereas SERCA2 remained mostly unchanged. That can imply that treatment causes selective expression of only one isoform and thus may propose SERCA3 as a...