Hodnocení poškození a reparace DNA u různých patologických stavů

Abstract

autor: Dana Tenorová název: Hodnocení poškození a reparace DNA u různých patologických stavů Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové studijní obor: Odborný pracovník v laboratorních metodách Chronická obstrukční plicní nemoc (CHOPN) je závažné onemocnění charakterizované obstrukcí dýchacích cest, které je způsobeno chronickou bronchitidou nebo plicním emfyzémem. V důsledku těchto změn dochází v organizmu k oxidačnímu stresu s následným poškozením různých biomolekul, které můžeme měřit pomocí širokého spektra metod. Hlavním cílem naší práce bylo měření poškození DNA u pacientů s CHOPN a porovnání s poškozením u zdravé kontrolní skupiny. Pomocí elektroforetické metody comet assay jsme v naší práci analyzovali různá poškození DNA - jednořetězcové zlomy DNA (SSB), oxidované puriny a oxidované pirimidiny. Využívali jsme, jak klasickou alkalickou variantu comet assay, tak i její enzymovou modifikaci, kde jsme pracovali s endonukleázou III (Endo III) a formamidopyrimidin-DNA-glykosylázou III (FPG). Provedené analýzy nám ukázaly signifikantně vyšší hodnoty poškození DNA u pacientů s CHOPN v porovnání s kontrolní skupinou, zejména při použití modifikované comet assay. Ověřili jsme tak možnost aplikace comet assay při analýze oxidačního poškození DNA u pacientů...

author: Dana Tenorová title: Evaluation of DNA damage and repair in various pathological stages Diploma thesis Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové field of study: Specialist in Laboratory Methods Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is a serious disease characterized by airflow obstruction that is caused by chronic bronchitis or pulmonary emphysema. As a result of these changes occurs in the organism the oxidative stress with subsequent damage to various biomolecules, which can be measured using a wide range of methods. The primary aim of our study was the evaluation of DNA damage in patients with COPD and comparison to the damage found in the healthy control group. We used electrophoretic method comet assay and we analyzed various types of DNA damage - DNA single strand breaks (SSB), oxidized purines and oxidized pirimidines. We used two forms of this method, i.e. a classical alkaline comet assay and its enzymatic modification, where we worked with endonuclease III (Endo III) and formamidopyrimidin-DNA-glycosylase-III (FPG). Our results showed the significantly higher levels of DNA damage in patients with COPD compared with the control group, especially when using the modified comet assay. In conclusion, we have examined the possibility of comet assay...