Charakterizácia ľudskej warfarin reduktázy

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Simona Sokolová Školiteľ: PharmDr. Petra Malátková, Ph.D. Názov diplomovej práce: Charakterizácia ľudskej warfarin reduktázy Warfarin je v súčasnosti terapeuticky široko používané antikoagulačné liečivo. Vzhľadom na úzke terapeutické okno warfarinu je dôležité kompletne poznať jeho metabolizmus v ľudskom tele. Na metabolizme warfarinu sa podieľajú oxidačné, redukčné a konjugačné reakcie. Redukčný metabolizmus warfarinu zatiaľ nebol podrobne študovaný. Premenou postrannej karbonylovej skupiny warfarinu vzniká redukovaný metabolit warfarin-alkohol. Je známe, že ľudské cytosolické a mikrozomálne frakcie vykazujú redukčnú aktivitu voči warfarinu, ale konkrétne enzýmy katalyzujúce redukciu nie sú zatiaľ známe. Cieľom tejto práce bolo identifikovať enzým/enzýmy podieľajúce sa na redukcii warfarinu a stanoviť kinetiku redukčných premien. Ľudká cytosolická a mikrozomálna pečeňová frakcia a rekombinantné enzýmy AKR1A1, AKR1B1, AKR1B10, AKR1C1, AKR1C2, AKR1C3, AKR1C4, CBR1 a CBR3 boli inkubované s warfarinom o rôznych koncentráciách. UHPLC kvantifikáciou vzniknutého warfarin-alkoholu boli stanovené špecifické aktivity jednotlivých enzýmov a frakcií. Bola potvrdená aktivita cytosolickej a mikrozomálnej...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Simona Sokolová Supervisor: PharmDr. Petra Malátková, Ph.D. Title of diploma thesis: Characterization of human warfarin reductase Warfarin is widely used anticoagulant drug. Considering the narrow therapeutic window of warfarin, it is important to fully understand its metabolism in human body. Oxidative, reductive and conjugation reactions are involved in warfarin metabolism. However, the reductive metabolism of warfarin has not been studied in details until now. The reduced metabolite of warfarin, i.e. warfarin-alcohol, is produced by the conversion of the carbonyl group of the side chain. It is known that human liver cytosolic and microsomal fractions exhibit warfarin reductase activity but the specific enzymes catalysing the reduction of warfarin are not known yet. The aim of this study was to identify the enzyme(s) participating in reduction of warfarin and to describe enzyme kinetics. Human liver cytosolic and microsomal fractions and recombinant enzymes AKR1A1, AKR1B1, AKR1B10, AKR1C1, AKR1C2, AKR1C3, AKR1C4, CBR1 and CBR3 were incubated with warfarin at various concentrations. The produced warfarin-alcohol was quantified by UHPLC and the specific activities of enzymes and...