Role of Gq-coupled receptors in brown adipocytes

Abstract

Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra biologických a lékařských věd Rheinische Friedrich-Wilhelms-University Bonn, Institute of Pharmacology and Toxicology Kandidát: Michaela Čajková Školiteľ: PharmDr. Miroslav Kovařík, Ph.D. Konzultant: Dr. Linda Sarah Hoffmann Názov diplomové práce: Úloha receptorů spřažených s Gq proteiny v hnědých adipocytech V mojej diplomovej práci, sme sa zamerali na štyri receptory spojené s Gq proteiny (F2R, α1DAR, LPHN1, TSHR) v hnedých adipocytoch (BAs), ktoré boli identifikované v screene, s najvyššou expresiou v nezrelých a zrelých BAs. Cieľom bolo potvrdiť predpoklad, že receptor pre thyroidný stimulujúci hormón (TSHR) hrá kľúčovú rolu v diferenciácií BAs a že F2R, LPHN1 a α1D-AR by mohli byť pre BAs dôležité. V našej štúdii sme zisťovali genetickú expresiu týchto štyroch receptorov v BAs pomocou analytických metód kvantitatívna reverzná-transkripcia polymerázová reťazová reakcia (qRT-PCR) a Western blot. Výsledky z analýz ukázali, že expresia TSHR bola zvýšená v zrelých BAs, znamená to, že TSHR indukuje dozrievanie BAs. BAs infikované s vlásenkovou RNA (sh-RNA) proti TSHR sa diferencovali podstatatne menej, čo sme dokázali aj pomocou Oil Red-O barvenia. Expressia adipocytného Proteinu 2 (aP2), peroxisome proliferator-activated...

Charles university in Prague, Pharmaceutical faculty in Hradci Králové, Department of biological and medical sciences Rheinische Friedrich-Wilhelms-University Bonn, Institute of Pharmacology and Toxicology Candidate: Michaela Čajková Supervisor: PharmDr. Miroslav Kovařík, Ph.D. Consultant: Dr. Linda Sarah Hoffmann Title of diploma thesis: Role of Gq-coupled receptors in brown adipocytes In my diploma thesis, we focused on four Gq-coupled receptors (F2R, LPHN1, α1DAR, TSHR) in brown adipocytes (BAs), which were identified in the screen as the highest expressed in immature and mature BAs. Our goal was to validate suggestion, that Thyroid stimulating hormone receptor (TSHR) plays a key role in differentiation of BAs and that F2R, LPHN1, α1D-AR might be important for BAs. In our study, we investigated gene expression of these four receptors in BAs, using analytical methodsquantitative reverse-transcriptase polymerase chain reaction (qRT-PCR) and Western blot. Results from analysis revealed, that expression of TSHR was increased in mature BAs, it means, that TSHR induce differentiation of BAs. The BAs transduced with short hairpin RNA (sh-RNA) against TSHR were less differentiated, this we proved also with Oil Red-O staining. Expression of adipocyte Protein 2 (aP2), peroxisome proliferator-activated...