Porovnání ESI a APCI ionizace při vývoji UHPLC-MS/MS metodiky pro stanovení fenolických kyselin

Abstract

Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Stanislav Pecha Školitel: doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Porovnání ESI a APCI ionizace při vývoji UHPLC-MS/MS metodiky pro stanovení fenolických kyselin. Fenolické kyseliny jsou aromatické sekundární metabolity široce rozšířené v celé rostlinné říši. Tato práce byla zaměřena na vývoj metody pro stanovení skupiny fenolických kyselin pomocí ultra vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s hmotnostním spektrometrem typu trojitého kvadrupólu. K separaci analytů byla použita kolona BEH C18 (1,7 µm; 2,1 x 100 mm). V rámci této práce byly optimalizovány parametry hmotnostního spektrometru s využitím ionizace elektrosprejem a chemické ionizace za atmosférického tlaku. Na závěr byla hodnocena citlivost, linearita a opakovatelnost metody. Nejprve byl proveden základní sken směsi analytů a byly vybrány vhodné prekurzorové ionty. Následovala optimalizace iontového zdroje (ionizace ESI- a APCI- ). Dalším krokem bylo provedení skenu produktových iontů a výběr vhodných iontových přechodů pro kvantifikační mód SRM a optimalizace jejich kolizních energií. Po optimalizaci nastavení byla změřena opakovatelnost (RSD < 1% pro retenční čas; RSD < 10% pro plochu píků, kromě...

Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Stanislav Pecha Supervisor: Assoc. Prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Title of Graduation Thesis: A comparison of ESI and APCI ionization during the development of UHPLC-MS/MS method for the determination of phenolic acids. Phenolic acids are aromatic secondary metabolites which are widely spread in the whole plant kingdom. The thesis deals with the development of the method for the determination of the group of phenolic acids by ultra high performance liquid chromatography coupled with triple quadrupole mass spectrometry. Chromatographic column BEH C18 (1.7µm; 2.1 x 100 mm) was used for the separation of analytes. The optimization of the mass spectrometry parameters was conducted for electrospray ionisation (ESI) and atmospheric pressure chemical ionization (APCI). Sensitivity, linearity and repeatability of this method were finally assessed. The full scan of mixture of analytes was firstly performed and suitable precursor ions were chosen. In the following step the ion source (ESI- and APCI- ) was optimized. The next step was scanning of product ions and choosing suitable ion transitions for quantification mode SRM and optimizing their collision energies. The repeatability after the...