Peptidové inhibitory imobilizované na magnetické nosiče a Sepharosu aplikované na separaci žaludečních aspartátových proteinas

Abstract

v češtině Lidská žaludeční šťáva obsahuje hlavně aspartátové proteinasy: pepsin A a pepsin C. Oba pepsiny jsou produkovány v žaludeční sliznici jako inaktivní pepsinogeny a k jejich aktivaci na příslušné pepsiny dochází v kyselém prostředí žaludku. Hladiny pepsinogenů v krevním séru odrážejí morfologický a funkční stav žaludeční sliznice. Téma dizertační práce je součástí projektu zabývajícího se zejména vypracováním metody pro separaci žaludečních aspartátových proteinas, která by byla vhodná pro diagnostické účely. Konkrétním předmětem předkládané práce byla příprava nových typů ligandů, která by umožňovala po imobilizaci separaci aspartátových proteinas. Pro studium vazebných vlastností pepsinů byly syntetizovány čtyři heptapeptidy obsahující D-leucinylový zbytek (Val-D-Leu-Pro-Phe-Phe-Val-D-Leu, Val-D-Leu-Pro-Tyr-Phe-Val-D-Leu, Val-D-Leu-Pro-Tyr- Tyr-Val-D-Leu a Val-D-Leu-Pro-Phe-Tyr-Val-D-Leu). Připravené heptapeptidy imobilizované na agarosové magnetické částice byly použity pro studium jejich interakcí s prasečím pepsinem A a potkaním pepsinem C. Zatímco prasečí pepsin A byl adsorbován na všechny heptapeptidy imobilizované na magnetické částice, potkaní pepsin C se na imobilizované heptapeptidy neadsorboval. Obdobné výsledky byly získány při afinitní chromatografii na heptapeptidech...

IN ENGLISH Human gastric juice contains mainly aspartate proteinases: pepsin A and pepsin C. Both pepsins are produced by gastric mucosa as inactive pepsinogens and they are activated to the corresponding pepsins in the acidic environment of the gastric lumen. The levels of pepsinogens in serum reflect the morphological and functional status of gastric mucosa. A subject of this thesis is a part of a long-term investigation that focuses on the elaboration of methods for separation gastric aspartate proteainases that would be suitable for diagnostic purposes. The preparation of new type ligands was a concrete subject of PhD. thesis that after their immobilization they can enable the separation of aspartate proteinases. Four heptapeptides containing D-leucinyl residue were synthetized (Val-D-Leu-Pro-Phe-Phe-Val- D-Leu, Val-D-Leu-Pro-Tyr-Phe-Val-D-Leu, Val-D-Leu-Pro-Tyr-Tyr-Val-D-Leu and Val-D- Leu-Pro-Phe-Tyr-Val-D-Leu. The prepared heptapeptides immobilized on agarose magnetic particles were used for the study of their interaction with porcine pepsin A and rat pepsin C. While porcine pepsin A was adsorbed to all heptapeptides immobilized to magnetic particles, rat pepsin C was not retarded. Similar results were obtained using heptapeptides immobilized to Sepharose. The situation was more complicated...