Sérové markery aktivity cholesterol 7α hydroxylasy.
Serum markers of cholesterol 7α hydroxylase activity
diploma thesis (DEFENDED)

View/ Open
Permanent link
http://hdl.handle.net/20.500.11956/85190Identifiers
Study Information System: 144359
Collections
- Kvalifikační práce [20304]
Author
Advisor
Consultant
Novotný, Jiří
Referee
Kovář, Jan
Faculty / Institute
Faculty of Science
Discipline
Animal Physiology
Department
Department of Physiology
Date of defense
1. 6. 2017
Publisher
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaLanguage
Czech
Grade
Good
Keywords (Czech)
cholesterol 7α hydroxylasa, metabolismus, lipoproteiny, cholesterolKeywords (English)
cholesterol 7α hydroxylase, metabolism, lipoproteins, cholesterolCholesterol 7-hydroxyláza (CYP7A1) je hlavní limitní enzym klasické dráhy syntézy žlučových kyselin (BA), kterou je u člověka katabolizována přibližně polovina cholesterolu. Stanovení enzymatické aktivity CYP7A1 je klíčovým předmětem ve výzkumu lipidového metabolismu. Přímé stanovení aktivity CYP7A1 v jaterní biopsii není většinou z etických důvodů povoleno, proto je využíváno nepřímých metod pomocí sérových markerů, např. 7- hydroxy-4-cholesten-3-onu (C4). Prvním, metodickým cílem práce bylo převedení zavedené HPLC metody pro stanovení C4 na LC-MS s účelem zvýšit citlivost metody. Při optimalizaci jsme se zaměřili na extrakční krok, tzv. SPE extrakci (solid phase extraction), která spočívala v úpravě koncentrací a objemů promývacího a elučního roztoku. Převedením metody z HPLC na LC-MS se citlivost zvýšila cca 7krát (LD = 1,39 ng/ml). V druhé, klinické části naší práce jsme se pokusili potvrdit předběžné výsledky našeho pracoviště o distribuci C4 v lipoproteinových částicích (LPP), s cílem najít parametr, který by koreloval s aktivitou CYP7A1 lépe než samotný C4. Předběžné výsledky na zdravých jedincích ukázaly, že koncentrace C4 je nejvyšší v HDL, a že distribuce C4 v jednotlivých LPP je mezi jedinci podobná. Experiment jsme opakovali na několika jedincích s rozdílnou hladinou cholesterolu....
Cholesterol 7-hydroxylase (CYP7A1) is the rate limiting enzyme of the classical pathway of bile acid (BA) synthesis, which catabolizes approximately half of cholesterol in man. Determination of CYP7A enzymatic activity is a key subject of lipid metabolism research. Direct determination of CYP7A1 activity in hepatic biopsy is mostly not allowed for ethical reasons, so indirect methods are used with serum markers such as 7α-hydroxy-4-cholestene-3- one (C4). The first, methodical aim of the work was to convert the introduced HPLC method for the determination of C4 to LC-MS in order to increase the sensitivity. We focused on the solid phase extraction step, adjusting the composition and volumes of the washing and elution solution. By converting the method from HPLC to LC-MS, the sensitivity was increased approximately 7 times (LD = 1.39 ng/ml). In the second, clinical part of our work, we attempted to confirm the preliminary results of our laboratory on the distribution of C4 in lipoprotein fractions (LPP) in order to find parameter that would correlate with CYP7A1 activity better than C4 level itself. Preliminary results (performed in healthy individuals) showed that most of C4 is carried on HDL, and that the C4 distribution within LPP fractions is similar among examined subjects. We repeated the...
Citace dokumentu
Metadata
Show full item recordRelated items
Showing items related by title, author, creator and subject.
-
Vliv diety na lipidogram u pacientů s dyslipidemií
Defence status: DEFENDEDVaněčková, Jana (Univerzita Karlova, 1. lékařská fakulta, 2017)Date of defense: 7. 8. 2017 -
Regulace metabolismu cholesterolu v hepatocytu
Defence status: DEFENDEDZiková, Kateřina (Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakulta, 2011)Date of defense: 9. 6. 2011Cílem této bakalá ské práce je shrnout současné poznatky o metabolismu cholesterolu a jeho regulaci v játrech. První část popisuje transport cholesterolu mezi tkán mi, který je zajiš ován lipoproteiny. Druhá část práce se ... -
Regulace aktivity cholesterol-7alfa-hydroxylázy
Defence status: DEFENDEDCejpková, Monika (Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakulta, 2012)Date of defense: 4. 6. 2012Cílem této bakalářské práce je charakterizovat mechanismy, které se podílejí na regulaci aktivity cholesterol-7α-hydroxylázy (CYP7A1) - klíčového enzymu klasické dráhy biosyntézy žlučových kyselin. V úvodu práce je podrobněji ...