Radiosensibilizace linie buněk nemalobuněčného karcinomu plic pomocí inhibitoru autofagie Lys05

Abstract

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Aneta Douděrová Školitel: RNDr. Miloslav Macháček, PhD. Konzultanti: pplk. doc. PharmDr. Aleš Tichý, PhD. Název diplomové práce: Radiosensibilizace linie buněk nemalobuněčného karcinomu plic pomocí inhibitoru autofagie Lys05 Nádorová onemocnění se v dnešní době řadí mezi nejčastější příčiny úmrtí v celosvětovém měřítku. Výzkum v oblasti léčby se proto zabývá vývojem nových metod, které by zlepšily zdravotní stav pacientů. Cílem této práce bylo zjistit, zda použití inhibitorů autofagie v kombinaci s ionizujícím zářením (IZ) přispívá k radiosensibilizaci buněčné linie nemalobuněčného karcinomu plic H1299. Vycházeli jsme z předpokladu, že autofagie je cytoprotektivní mechanismus, který zajišťuje nádorovým buňkám ochranu v nepříznivých podmínkách jako např. IZ. V práci jsme pomocí fluorescenční mikroskopie s použitím zeleného fluorescenčního barviva LysoSensor Green DND-189 studovali kvalitativní změny buněk H1299 ošetřených novým inhibitorem autofagie Lys05 i v praxi již zavedeným inhibitorem Bafilomycinem A1. Intenzitu fluorescence jsme následně kvantifikovali pomocí průtokové cytometrie. Z výsledků vyplývá, že pre-inkubace inhibitory autofagie v kombinaci s IZ vede k morfologickým změnám buněk a k...

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Bc. Aneta Douděrová Supervisor: RNDr. Miloslav Macháček, PhD. Consultants: pplk. doc. PharmDr. Aleš Tichý, PhD. Title of diploma thesis: Radiosensitization of non-small cell lung cancer cell line using autophagy inhibitor Lys05 Nowadays, tumor diseases belong to the world's main causes of death. Research in the area of tumor treatment deals with the development of new methods that improve the health of patients. The aim of my diploma thesis was to find out if the usage of autophagy inhibitors in combination with ionizing radiation (IR) contributed to radiosensitization of non-small cell lung cancer cells H1299. It was based on an assumption that autophagy was a cytoprotective mechanism leading to a cell survival during stress conditions such as IR. In order to examine qualitative changes of H1299 cells pre-treated by the new autophagy inhibitor Lys05 or well known autophagy inhibitor Bafilomycin A1 we used fluorescence microscopy in combination with green staining by LysoSensor green DND-189. The intensity of fluorescence was quantified by flow cytometry. The results have shown that pre-treatment by autophagy inhibitors in combination with IR led to morphological changes of cells and to...